大竹蛏β-整合素基因SgβInt的特性分析和重组表达

整合素作为一种细胞粘附因子,在细胞粘附、迁移、增殖、凋亡和吞噬等过程中发挥重要作用。本研究利用分子克隆技术获得了大竹蛏(Solen grandis)β-整合素基因(SgβInt)的c DNA全长,分析了其编码氨基酸序列的进化特点,并以SWISS-MODEL预测了氨基酸序列的三级结构。SgβInt基因序列全长为1168 bp,5'和3'非编码区(UTR)分别为61 bp和18 bp,开放阅读框(ORF)为1089 bp,编码362个氨基酸,理论等电点约为4.98,分子量为30.0 kDa。通过荧光定量PCR法检测了SgβInt在健康大竹蛏各组织中以及大竹蛏受到脂多糖、肽聚糖和葡聚糖等微生物多糖刺激后的表达。结果显示,SgβInt在血细胞、鳃、肝胰腺、性腺、肌肉和外套膜等组织中均可表达,在鳃中的表达量最高;脂多糖、肽聚糖和葡聚糖都可以诱导SgβInt表达量上调,SgβInt的表达量分别在脂多糖和葡聚糖刺激后的3 h和48 h达到最高;肽聚糖刺激后SgβInt表达量上调幅度最大,在6 h时达到最高,证实SgβInt参与大竹蛏抵御外源微生物的免疫应答。利用基因重组技术构建了SgβInt的重组表达载体,为进一步分析软体动物整合素的功能、揭示大竹蛏先天性免疫机制奠定了基础。