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【目的】利用朊蛋白双基因敲除(PRNP-/-)羊制备朊蛋白多克隆抗体,并对其特性进行分析。【方法】构建山羊朊蛋白(PrP)原核表达载体,转入大肠杆菌并诱导表达,纯化获得羊PrP;将获得的PrP免疫PRNP-/-山羊,制备朊蛋白特异性的多克隆抗体;并对获得的朊蛋白多克隆抗体进行ELISA及Western-blot检测。【结果】获得了大量的朊蛋白特异性抗血清,间接ELASA检测抗血清中朊蛋白多克隆抗体的效价为25600;Western-blot检测显示所制备抗体不仅可以识别鼠、牛、羊脑组织内源性朊蛋白,而且能识别鼠脑组织内朊病毒。【结论】PRNP-/-转基因山羊可用于制备大量高亲和力朊蛋白多克隆抗体,获得的抗体可用于多种动物朊蛋白及朊病毒类疾病的检测。 相似文献
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为探明铜离子在朊蛋白构象转化中的作用机制,进一步研究构象病发生机制提供基础数据,利用DNA重组技术,绵羊朊病毒蛋白在大肠杆菌BL2l(DE3)中高效表达,获得绵羊PrP^C重组蛋白(OvPrP^C),与氯化铜在体外结合。对CuCl2处理后的蛋白进行圆二色谱(CD)和蛋白酶K(PK)消化试验进行转化调节后蛋白抗性分析。结果表明,OvPrP^C分子量为25172.80U,其二级结构主要由α-螺旋构成,含少量β-折叠。经过CuCl2体外调节后,OvPrP^C结构中α-螺旋减少,β-折叠增加。而蛋白酶K消化后,CuCl2作用后的蛋白产生了PK抗性。为进一步的神经细胞毒性试验提供了宝贵的材料,进而为探讨构象病发生机理提供有力的科学依据。 相似文献
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