文心兰高效再生体系的建立

[目的]建立文心兰高效再生体系,为利用转基因技术进行品种改良提供科学依据.[方法]以文心兰柠檬绿的无菌苗叶片为材料,探讨不同植物生长调节剂配比对其原球茎诱导的影响,开展增殖、生根及移栽研究,建立其高效稳定的再生体系.[结果]影响文心兰原球茎诱导的3种植物生长调节剂主次排序为萘乙酸(NAA)>噻苯隆(TDZ)>6-苄氨基嘌呤(6-BA),在1/2MS培养基中添加0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA和0.3 mg/L TDZ的诱导率最高,达48.0%.培养基中活性炭含量及碳水化合物种类对文心兰原球茎增殖的影响存在明显差异,不同活性炭含量处理间的原球茎增殖系数存在显著差异(P<0.05,下同),添加1.0 g/L活性炭较添加0.5 g/L活性炭的增殖系数显著升高,不同碳水化合物种类间的原球茎增殖系数排序为海藻糖>麦芽糖>蔗糖,最佳增殖和分化培养基为1/2MS+4.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+1.0 g/L活性炭+20 g/L海藻糖.添加10%椰子水的文心兰幼苗生根数显著高于添加10%香蕉汁和10%苹果汁,每株平均生根量接近4.00条,即生根效果最佳的培养基为1/2MS+0.8 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+10%椰子水.移栽过程中根部用水苔包裹后再移至椰糠中,保证光照、水分适宜,适当添加缓释肥,移栽成活率可达100%.[结论]利用海藻糖或麦芽糖作为碳源的文心兰原球茎增殖效果较优,生根数和生根质量优势明显;不同植物生长调节剂配比、碳源和有机物的添加对文心兰组织培养具有明显的促进效果.     

荆半夏类原球茎组培快繁体系的优化

以荆半夏为试材,采用正交实验设计,研究了不同外植体及消毒方法对内生菌的影响,并系统地研究了外植体及细胞分裂素对类原球茎诱导的影响、类原球茎向种茎转化的方法,以期为提升半夏类原球茎途径组培快繁效率提供参考。结果表明:叶片未展开时叶柄作外植体,内生菌污染较少,诱导类原球茎效果好。外植体用升汞浸泡前用0.1%苯扎溴铵溶液浸泡3 min有助于降低内生菌污染率。幼嫩的叶柄在培养基MS+TDZ 0.5~1.0mg·L~(-1)上能较好地形成类原球茎。类原球茎在组培过程中形成根和叶柄后移栽较好,类原球茎在培养基1/3MS+6-BA 0.5mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)上能较好形成丛生苗,丛生苗移栽后可形成小块茎。     

响应面试验优化霍山石斛原球茎增殖培养基

为可持续开发霍山石斛资源，采用响应面法优化霍山石斛原球茎增殖培养基。在单因素试验基础上，根据Box Behnken试验设计原理，采用三因素三水平的响应面分析法，以增殖率为响应值进行回归分析。结果表明，萘乙酸（简称NAA）及6 苄氨基嘌呤（简称6 BA）浓度对增殖率影响最为显著，6 BA与马铃薯两者间交互作用显著，适宜的NAA、6 BA及马铃薯浓度分别为0.05 mg·L-1、0.70 mg·L-1和185 g·L-1，此时增殖率为2 989.82%±205.55%，与模型预测值基本符合。响应面法优化霍山石斛原球茎增殖培养基切实可行。     

虎雪兰玻璃化超低温法脱毒技术的研究

以兰属花卉虎雪兰组培原球茎为试材,采用玻璃化超低温法对兰花病毒脱除进行了研究,以期为虎雪兰玻璃化超低温法脱毒体系的建立提供参考依据。结果表明:在蔗糖浓度0.5 mol·L-1预培养4 d,然后在蔗糖0.6 mol·L-1加载液冰上处理50 min,之后转入PVS2溶液冰上玻璃化处理120 min,再液氮冷冻40 min,37℃水浴解冻3 min,最后卸载液(1/2MS+1.2 mol·L-1蔗糖)卸载20 min,待恢复培养后,原球茎成活率可达到65%以上,随机检测不同处理样品的脱毒率可达97%。     

文心兰的茎尖及花梗组织培养和快速繁殖探讨

将文心兰的茎尖以及花梗使用N6+6-BA 2.0mg/L的培养基;花梗分化芽,同时茎尖同时分化芽和原球茎。使用6-BA低浓度培养液对分化芽进行促进生长;使用高浓度6-BA促进原球茎的分化。结果表明:1/2N6+6-BA0.2mg/L+NAA 0.2mg/L培养基对于文心兰继代增值以及后期苗木成长促进效果良好。在培育、繁殖文心兰的后期肥料及激素的使用以及病虫害的防治,也是影响文心兰幼苗快速繁殖的重要因素。     

狗蔷薇PaWUS基因的超量表达诱导转基因烟草根尖形成不定芽

WUSCHEL是植物干细胞命运的决定基因,在植物发育过程中WUSCHEL基因的表达决定着干细胞的形成和器官的发生.从狗蔷薇的类原球茎中克隆出其同源基因；经过对其进行蛋白质序列比对和系统发育分析,将其命名为Ra WUS基因.构建在XVE系统下的化学调控的表达载体.在该系统下,Ra WUS基因的超量表达能诱导转基因烟草根尖形成不定芽；同时显微观察表明,根部的皮层中有圆球形的分生组织干细胞团的产生.结果表明:Ra WUS基因的过量表达能够促使根的皮层中薄壁细胞转变成为分生组织干细胞而形成不定芽在根尖异位发生,说明其能够在植物的根尖中诱导茎尖分生组织干细胞的活性和发育的可塑性.     

不同基本培养基及培养方式对文心兰原球茎增殖的影响

以薄叶系文心兰Alha′Iwanaga′茎尖诱导形成的原球茎 (PLB)为材料 ,比较不同基本培养基类型 (MS、1/ 2MS、VW )及不同培养方式 (固体培养、液体培养 )对原球茎增殖的影响 ,结果表明 :文心兰PLB增殖以 1/ 2MS为基本培养基配合振荡及回旋培养方式较好 ,固体培养方式因其幼苗形成率高 ,不适合进行文心兰PLB增殖培养     

大花蕙兰幼苗叶片诱导类原球茎

以大花蕙兰无菌幼苗叶片为外植体,成功诱导类原球茎(PLB).叶片部位是影响诱导的关键,只有叶片基部片段能成功诱导出PLB.不同激素配比以及外植体来源对PLB诱导有重要的影响.低浓度的2,4-D和较高浓度的6-BA对于拟球茎诱导PLB具有显著的促进作用.当2,4-D浓度高于0.6 mg/L时,PLB诱导受到显著抑制.较高的2,4-D水平可能有利于PLB诱导初始阶段,但不利于PLB诱导中后期的进一步发育.不同基因型有不同的最佳激素组合.添加0.2 mg/L的NAA对大花蕙兰PLB诱导没有显著影响,但在有的基因型中对PLB诱导有促进作用.以叶片基部片段诱导大花蕙兰PLB是可行的,为转基因研究提供了再生技术基础.     

大花蕙兰种子萌发的原球茎在不同培养基上的生长效研究

大花蕙兰的种子在1／2 MS培养基上萌发并生长到直径0．5～1．0 mm后，转接到新的培养基继续生长并进行茎叶和根的分化。试验选择MS、1／2 MS、KC、VW四种培养基，各添加NAA 1 mg／L，pH值5，2。每个培养皿接种原球茎20个，培养温度25℃，光照强度3000 lx。经过90d的培养，期间每隔15d进行称重，计算出原球茎生长过程中质量的增加。结果证明萌发后的原球茎在1／2 MS培养基上生长最佳，其次为MS和KC，VW培养基不适宜原球茎的继续生长。     

文心兰茎尖离体培养研究

文心兰茎尖培养的研究，试验结果表明：文心兰茎尖在MS BA2mg／L NAA0．5mg／L培养基上，离体培养1个月后产生原球茎．改良KC基本培养较适原球茎的增殖；用BAI．5mg／L NAA0．2mg／L的激素配比，原球茎月增殖宰可达332．5％；CW可以减少原球茎褐死现象和促进原球茎的增殖：壮苗阶段，以附加NAA0．5% 10％香蕉汁的效果较好．水苔是良好的移栽基质，成活率在85．3％．