农杆菌介导的蝴蝶兰基因转化系统的建立

 针刺后的蝴蝶兰‘White Hikaru’的类原球茎(PLB)，与含绿色荧光蛋白基因( )和潮霉素磷酸转移酶基因(^p￡)的pCAMBIA 1300一SmGFP的根瘤农杆菌LBA4404 共培养，培育出了转基因的蝴蝶兰。经绿色荧光蛋白检测和Southern印迹，证实了再生植株中含cop基因和hpt基因。     

Enhanced micropropagation of Dendrobium huoshanense C.Z. Tang et S.J. Cheng through protocorm-like bodies: The effects of cytokinins,carbohydrate sources and cold pretreatment

The effects of cytokinins, carbohydrate sources and cold pretreatment on the conversion of protocorm-like bodies (PLBs) to shoots were investigated for the enhancement of micropropagation of Dendrobium huoshanense C.Z. Tang et S.J. Cheng, an endangered medicinal plant in China. The effects of cytokinins and carbohydrate sources on the conversion of PLBs to shoots depended on their types and concentrations. The best results in terms of shoot development from PLBs occurred on 1/2 MS medium supplemented with 20 μM kinetin and 10 g l⁻¹ maltose. Cold pretreatment at 10 °C for 1–2 weeks significantly enhanced the conversion of PLBs to shoots, and over 1300 shoots were obtained from one gram of PLBs after 3 months of culture. The developed shoots were rooted on growth regulator-free MS medium supplemented with 8 g/l banana paste to give complete plantlets, which were successfully acclimatized with a survival rate of approximately 65%. The results indicate that a suitable cold pretreatment (10 °C for 1 week) followed by the use of 20 μM kinetin and 10 g/l maltose in 1/2 MS medium would produce a large number of shoots from PLBs for plantlet regeneration of D. huoshanense.     

不同脱水条件下蝴蝶兰类原球茎的失水程度与耐脱水性

为了解蝴蝶兰类原球茎(PLB)耐脱水性规律,本研究通过取一定数目、鲜重的PLB样品分别经不同相对湿度或时间脱水后进行相关测定,结果表明经相对湿度52%下脱水2d的PLB含水率13.31g/gdw(脱水重/鲜重比值40.62%)是质膜损伤和胁迫致死的临界含水率。虽然不同脱水条件使材料达到接近的含水率,但较高湿度脱水对PLB组织细胞伤害较小。相较于含水率指标,PLB脱水重/鲜重比值与相对电导率、成活率有良好的线性关系。进一步的研究表明PLB脱水处理前用水浸泡不能明显提高脱水后的PLB脱水重/鲜重比值,但能明显提高成活率。从实验结果我们可以得出,慢速脱水蝴蝶兰PLB可减轻脱水损伤,降低脱水损伤对PLB起始含水率的敏感性;采用PLB脱水重/鲜重比值替代含水率表示材料失水程度是可取的。     

大花蕙兰种子萌发的原球茎在不同培养基上的生长效研究

大花蕙兰的种子在1／2 MS培养基上萌发并生长到直径0．5～1．0 mm后，转接到新的培养基继续生长并进行茎叶和根的分化。试验选择MS、1／2 MS、KC、VW四种培养基，各添加NAA 1 mg／L，pH值5，2。每个培养皿接种原球茎20个，培养温度25℃，光照强度3000 lx。经过90d的培养，期间每隔15d进行称重，计算出原球茎生长过程中质量的增加。结果证明萌发后的原球茎在1／2 MS培养基上生长最佳，其次为MS和KC，VW培养基不适宜原球茎的继续生长。     

大花蕙兰幼苗叶片诱导类原球茎

以大花蕙兰无菌幼苗叶片为外植体,成功诱导类原球茎(PLB).叶片部位是影响诱导的关键,只有叶片基部片段能成功诱导出PLB.不同激素配比以及外植体来源对PLB诱导有重要的影响.低浓度的2,4-D和较高浓度的6-BA对于拟球茎诱导PLB具有显著的促进作用.当2,4-D浓度高于0.6 mg/L时,PLB诱导受到显著抑制.较高的2,4-D水平可能有利于PLB诱导初始阶段,但不利于PLB诱导中后期的进一步发育.不同基因型有不同的最佳激素组合.添加0.2 mg/L的NAA对大花蕙兰PLB诱导没有显著影响,但在有的基因型中对PLB诱导有促进作用.以叶片基部片段诱导大花蕙兰PLB是可行的,为转基因研究提供了再生技术基础.     

Study on the rapid propagation of Phalaenopsis hybrid

This paper studied the rapid propagation technology of Phalaenopsis hybrid by using the peduncle buds as the explants, and screened out a kind of culture medium, which was simple, rapid, available and high rate of propagation.     

大花蕙兰原球茎增殖、分化与离体保存的研究

以大花蕙兰原球茎为材料,从培养时间、基本培养基、糖浓度、培养方式及切割方式5个方面探讨了原球茎增殖、分化及离体保存的问题。结果表明,2个月内随着培养时间的延长,原球茎增殖与分化越显著,但培养2个月后,原球茎增殖不明显,分化却持续增加;1/2MS基本培养基利于原球茎增殖与分化,而3MS基本培养基利于原球茎保存;糖浓度的高低对原球茎增殖与分化影响显著,20 g·L~(-1)蔗糖适于原球茎保存,50 g·L~(-1)蔗糖适于原球茎增殖,而原球茎分化成苗应选用30 g·L~(-1)白糖;在3种培养方式中,固体培养利于原球茎分化,液体振荡培养利于原球茎增殖,液体静置培养利于原球茎离体保存;片状切割法利于原球茎增殖与分化,整体剥离接种法利于原球茎保存。即以2.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.1 mg·L~(-1) NAA为激素组合时,以片状切割法接种原球茎于1/2MS+50 g·L~(-1)蔗糖的培养基中并以液体振荡方式培养时利于原球茎增殖;以片状切割法接种原球茎于1/2MS+30 g·L~(-1)白糖的培养基添中并以固体方式培养时利于原球茎分化成试管苗;以整体剥离法接种原球茎于3MS+20 g·L~(-1)蔗糖培养基中并以液体静置方式培养时利于原球茎保存。上述结论为大花蕙兰试管苗快速繁殖与离体保存提供了有效的技术支持。     

蝴蝶兰类圆球茎的化学诱变试验

用不同浓度的甲基磺酸乙酯(EMS)和叠氮化钠(NaN3)对蝴蝶兰类圆球茎(PLB)作不同时间处理。结果显示:EMS和NaN3均可使部分PLB白化或褐化并逐渐致死。0.4%EMS接近PLB半致死剂量。PLB切片观察发现:用EMS和NaN3处理均可使细胞体积增大,细胞形状改变,细胞质浓缩。较高浓度NaN3处理的PLB细胞中出现晶体物质、双核、畸形核和核仁丢失等现象。较高浓度EMS处理的PLB细胞中出现微核、畸形核、多核、核破裂和核仁丢失等现象。同浓度的同种诱变剂随处理时间的增加材料的变异程度有增大趋势,但不很显著。EMS比NaN3的诱变处理效果好。0.5%EMS可作为创造蝴蝶兰PLB突变体的参考浓度。     

铁皮石斛组织培养研究

为了解决铁皮石斛种苗稀缺的现状,提高种苗繁殖率,以铁皮石斛种子(成熟率80％～90％)、带芽茎段、叶片3种材料作为外植体,进行组织培养研究.结果表明:铁皮石斛最适宜外植体材料是种子,最适宜的类原球茎诱导培养基为1/2MS,最适宜的类原球茎增殖培养基为MS+KT1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+CM100 mL/L+活性炭0.3 g/L,最适宜类原球茎分化培养基为MS+KT1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+100 mL/L苹果汁,最适宜生根培养基为MS+IBA1.5 mg/L.     

长期继代蝴蝶兰类原球茎对抗氧化剂的生理响应及DNA稳定性分析

为了解抗氧化剂减缓长期继代蝴蝶兰类原球茎衰老的机理,本实验在培养基添加抗氧化剂100 mg/L半胱氨酸和8 g/L甘露醇继代类原球茎24个月,分析其相关氧化指标及DNA稳定性。结果表明,类原球茎培养期间处理组总活性氧水平变化趋势与对照组不同,处理组比对照组低,对照组总活性氧水平消长趋势与超氧阴离子(O_2~-)生成速率较为一致,处理组则与羟自由基(·OH)相对含量的消长趋势较一致。继代期间丙二醛含量变化趋势与总活性氧水平变化趋势相似,处理组比对照组低。类原球茎DNA的SRAP分析结果表明,继代培养期间处理组与对照组间均未发生明显的DNA差异。类原球茎DNA甲基化程度变化趋势与总活性氧水平变化大体相同,中后期处理组比对照组低。