基于3种抗原的融合表达蛋白建立牛分枝杆菌抗体ELISA检测方法

为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,以牛分枝杆菌Rv3403c、CFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原,通过酶切连接和重叠延伸PCR方法,将3个抗原基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接,构建出pET-28a-Rv3403c-CFP10-ESAT6并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并分析其反应原性。以纯化后的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：通过SDS-PAGE和Western blot鉴定分析,成功表达并纯化出包涵体蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,目的蛋白具有良好的反应原性;以融合蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与其他牛病原体阳性血清不发生交叉反应。临床结果显示,本方法与商品化试剂盒阳性符合率为66.7%,阴性符合率99.3%,总符合率为99.3%。研究表明,成功串联表达了具有良好反应原性的融合蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,并以此为包被抗原建立了一种牛分枝杆菌间接ELISA抗体检测方法,为检测和净化牛结核病提供了诊断工具。     

EDTA对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白表达及免疫原性的影响

用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基,培养鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)Ⅰ型,将未加入EDTA的TSB培养的RAⅠ型菌株作对照。比较后发现,加入EDTA组的外膜蛋白(OMPs)的SDS-PAGE图谱发生改变,从34 ku~100 ku增加了多条蛋白条带,特别是39 ku,60 ku和110 ku蛋白浓度较大。电泳胶经Western-blot(康复血清作为一抗,自制酶标兔抗鸭为二抗),与对照组相比,实验组增加了39 ku条带。实验证明,加入金属离子螯合剂EDTA对外膜蛋白的表达和免疫原性均有影响。     

江西省自然保护区建设存在的问题与对策

江西省自然保护区建设存在管理体系不够完善、管理体制不顺、经营主体不明确、保护与开发利用不协调、建设资金不足等问题,必须完善有关法律法规,明确经营主体,健全管理机构,协调保护与开发的关系,多渠道筹措资金,建立合理的利益分配制度,以促进全省保护区建设与发展。     

1株大肠杆菌O157鸭源噬菌体的分离、纯化及其特性鉴定

将安徽某鸭场的400份鸭粪样品离心,微孔滤器过滤后提取上清液,将上清液与均匀涂布于LB固体培养基上的大肠杆菌O157ATCC43889滴定,6 h后初步鉴定噬菌体。将疑似存在噬菌体的上清液采用双层琼脂平板法进一步鉴定,结果分离鉴定了1株噬菌体,命名为EC43889-30。3次纯化后得到直径约为2 mm的噬菌斑,富集得到纯培养物。电镜观察,噬菌体粒子无尾,为直径50 nm左右的正六边形,形态与复层病毒科(Tectiviridae)的成员相似。将纯培养物稀释至107 pfu/mL,每隔10 min(至50 min)分别测其在50℃,60℃和70℃时噬菌体存活数,热稳定曲线显示,50℃时存活率均在70%左右,60℃时存活率明显下降,70℃时完全失活。宿主谱检测结果显示,其宿主范围较窄,对测试的42株鸭源大肠杆菌无裂解作用。     

我国种子检验工作现状及对策--以甘肃省为例

为了在农业种植中保证种植质量和经济效益,就需要保证种植的特性和质量,但在当前我国种子检验工作中,还存在一些问题,影响着种子的质量。基于此,针对我国种子检验工作现状、存在的问题进行分析,给出一定的解决对策。     

特异性识别K1荚膜大肠杆菌的噬菌体PNJ1809-36生物学特性及全基因组分析

本研究以K1荚膜大肠杆菌DE058（avian pathogenic Escherichia coli）为宿主菌,从鸡粪中分离烈性噬菌体PNJ1809-36并对其进行生物学特性的研究和基因组测序及分析。将噬菌体PNJ1809-36进行分离纯化,通过形态学观察、最佳MOI测定、一步生长曲线测定、温度和酸碱耐受性测定、体外裂解能力测定以及全基因组测序及分析来研究该噬菌体的生物学特性和基因组特征。结果显示：噬菌体PNJ1809-36能够形成清晰透明的噬菌斑,其电镜照片显示为具有收缩尾部的肌尾科噬菌体;宿主谱分析结果显示,该噬菌体能够特异性裂解具有K1荚膜的大肠杆菌;最佳MOI为0.01;一步生长曲线结果显示,其潜伏期为10 min,爆发期为40 min;噬菌体PNJ1809-36在40和50℃下存活良好,60℃ 30 min可使噬菌体完全失活;噬菌体在pH3~11之间均可存活,最适pH为6;体外裂解试验表明,该噬菌体可在6 h内完全抑制宿主菌的生长。经基因组测序与分析,噬菌体PNJ1809-36基因组全长为152 343 bp,GC含量为39.11%,含有277个开放阅读框（ORF）,11个tRNA基因。同源性分析显示其与早期发现的K1特异性的短尾噬菌体（如K1F、K1E）的同源性较低,而与噬菌体nepoznato、PVP-SE 1和phAPEC8等K1特异性噬菌体同源性较高,基因序列相似性达90%。噬菌体PNJ1809-36是一株特异性识别K1荚膜大肠杆菌的烈性噬菌体,属于肌尾科噬菌体新的系统发育分支。其针对K1荚膜的特性,提示该噬菌体在鉴定K1型大肠杆菌和治疗K1型大肠杆菌引起的疾病方面存在潜力。     

四川省部分猪场猪链球菌病免疫前后的病原及抗体调查

猪链球菌是重要的人兽共患病病原。本研究通过对四川省部分规模猪场猪链球菌灭活疫苗免疫前、一次免疫后及二次免疫后,分别对猪进行三次采样,检测猪扁桃体拭子中的病原和血清样本抗体水平。结果表明:与免疫前相比,二次免疫后60 d,猪链球菌带菌率由8.75%降到0,而抗体阳性率11.25%上升到100%。同时,部分未免疫猪群存在猪链球菌的隐性感染,猪链球菌病灭活疫苗免疫后,明显减少了猪群中猪链球菌的带菌率,整个猪群未发生猪链球菌病病例。免疫预防有效降低了猪群中猪链球菌带菌率和感染率,是防控猪链球菌病的重要措施之一。     

太湖地区水稻产量、根圈土壤矿质态氮及氮素径流损失对氮肥的响应

通过氮肥梯度小区试验,研究了施氮对水稻根圈土壤及土壤溶液矿质态氮、叶片SPAD值、氮素累积量、水稻产量和氮素径流损失的影响.结果表明:基肥显著增加了苗期水稻根圈土壤矿质态氮,追肥对水稻根圈土壤及土壤溶液矿质态氮含量影响较小;施氮对水稻顶三叶SPAD值影响较为显著,而不同氮肥梯度下SPAD值无显著差异.分蘖期后,施氮量和植株氮素累积量存在显著正相关关系;收获期秸秆氮累积随着施氮量的增加而增加,但籽粒氮累积受施氮量影响较小.施氮量的增加对水稻增产效果并不显著,却显著提高了总氮径流损失,降低了氮肥农学效率,综合考虑产量、农学效率和总氮径流损失,该地区施氮量需低于理论最高产量施氮量(243 kg·hm^-2);该季135 kg N·hm^-2施氮量处理产量虽有所下降(差异不显著),但其农学效率最高且总氮径流损失最低.针对污染严重区域,在保证产量的基础上采用低氮肥投入而极大限度地降低施氮对环境的潜在污染是可行的.     

中国古代刑罚嬗变的历史启示

<正>一、中国古代刑罚嬗变的趋势中国古代刑罚发展的特点,就是刑罚的逐渐文明化、开放化、人道化和轻刑化的过程。(一)刑罚体系的中心由死刑、肉刑转向自由刑刑罚改革,首先意味着是刑法结构的改革。[1]刑罚嬗变史上看,在奴隶制社会和封建社会时期,由于环境恶     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌小菌落突变株的表型鉴定及其遗传基础分析

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是导致奶牛乳房炎的主要病原菌,其在抗菌药物的作用下可形成小菌落突变株(small colony variants,SCVs)。为了探讨牛源性金黄色葡萄球菌在表型转变过程中的遗传基础,对临床分离的奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌野生型及其SCV、人工诱导的SCV、临床SCV的表型回复株进行了相关特性及基因组序列的分析。结果发现:金黄色葡萄球菌的SCV和野生型差异显著,野生型菌株在庆大霉素及磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(SXT)的诱导下绝大多数产生甲萘醌缺陷型SCV,仅有1株经SXT诱导产生的SCV为胸腺嘧啶核苷(胸苷)缺陷型。菌株基因与表型之间存在明显关联,与野生型基因组相比,临床SCV均显示喹啉/醌代谢相关基因menA的碱基缺失,可能导致蛋白表达提前终止。庆大霉素诱导的SCV在基因menB处出现碱基位点突变;SXT诱导的SCV在代谢相关基因MW1485和aroA处分别出现基因片段的缺失和插入。回复株可能通过在代谢相关基因menA二次突变来恢复功能。本研究首次利用全基因组测序技术分析牛源性金黄色葡萄球菌SCV表型改变的遗传基础,有助于对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌SCV产生更深入的理解。