转基因抗虫玉米的定量检测

建立高效、快速、准确的抗虫转基因玉米MIRl62转化体特异性实时荧光PCR（real—timePCR）检测方法。采用SYBRGreenI和Taqman探针2种定量方法对抗虫转基因玉米MIRl62进行了检测研究。SYBRGreenI法MIRl62转化体特异性片段和内标基因zSSIlb的熔解曲线均表现为单一峰，扩增特异性强；二者的扩增效率均在90％100％之间，标准曲线相关系数帮均大于0．998。2种定量方法的检测限（LOD）均为24个拷贝，定量限旺D0为48个拷贝，灵敏度较高。重复测试结果表明，SYBRGreenI法的标准偏差（㈣变化范围为0．05～0．13，相对标准偏差（RSD）范围为0．17％～0．40％，Taqman探针法的SD变化范围为0．03～0．14，RSD范围为0．11％～0．44％，说明2种定量检测方法具有良好的重复性和精密度。对MIRl62含量为3％、1％和0．5％的混合样品的定量结果为：3．13％、1．09％、0．53％（SYBRGreenI法）和3．07％、1．02％、0．50％（Taqman探针法），RSD均小于10％，T检验分析表明2种定量方法定值结果差异不显著。本研究建立的2种实时荧光定量PCR均可有效对转基因玉米MIRl62进行定量检测，可根据不同实际需求及实验室条件进行选择相应的检测方法。     

转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片测试方法的研制

根据7种转基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603的重组DNA结构，利用Primer premier 5.0引物设计软件分别设计转化体特异性引物，优化PCR反应条件，对引物特异性及灵敏度进行验证。结果表明，所设计引物特异性强，灵敏度达0.1%。在植物基因组与外源基因的连接区域，利用Primer premier 5.0和Oligo 6.0软件分别设计和筛选7种转基因玉米40mer oligo转化体特异性探针，制备转基因玉米的寡核苷酸芯片，并对芯片检测的特异性、重复性及检测灵敏度进行检验。证明所设计探针特异性强，灵敏度达0.01%。与PCR检测方法相比，基因芯片检测法灵敏度高、特异性强，可有效检测及鉴定多种转基因玉米，大大提高检测的准确率和效率。     

山东省沙地葡萄茎痘相关病毒的检测

为明确沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)在山东省发生的情况,2006-2007年在葡萄主栽区和葡萄品种资源圃进行了田间调查、样品采集和病原检测。应用GRSPaV外壳蛋白基因表达获得的多克隆抗体,经间接酶联免疫吸附试验(PTA-ELISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测,在2a采集的298个样品中,125个样品为阳性反应,阳性率41.95%。125个阳性样品涉及43个品种,品种被侵染率74.14%。研究对检测的样品用RT-PCR法验证,有3对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340bp片段、外壳蛋白(CP)基因842bp片段和RNA聚合酶(RdRp)基因499bp片段。     

转基因玉米转化体特异性PCR检测技术研究

根据不同转基因玉米中重组DNA结构，分别对转基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603设计转化体特异性引物进行PCR检测。在此基础上分别以玉米内参照基因(ZSSIIb)作对照，对Bt11、Mon810、TC1507和GA21、NK603、Bt176分别作两对四重PCR反应，实现在同一个PCR反应管中同时对3种转基因玉米及内参照基因的特异性检测。     

玉米基因枪转化Bt基因的研究

以玉米自交系A188为试材,将含有Bar基因和Bt基因的质粒pBW3导入玉米幼胚内,获得了转基因抗性苗。抗性植株点杂交及Southern杂交结果显示,该基因已整合到抗性玉米植株体内,外源基因在玉米基因组内有4个拷贝。     

抗虫耐除草剂棉花生存竞争能力研究

本试验对抗虫耐除草剂棉花639017、当地棉花冀棉106在两种土壤类型条件下开展生存竞争能力研究。结果表明:正常播种条件下,抗虫耐除草剂棉花和冀棉106在大坝沙壤土出苗率低于5%,在试验基地壤土出苗率低于10%,两种土壤类型下,棉花覆盖度均远低于杂草覆盖度,棉花株高仅20 cm左右,未完成正常生长发育。在地表撒播试验中,试验棉花均未出苗。另外栽培地竞争试验中,抗虫耐除草剂棉花株高及产量均低于冀棉106,部分生育期差异显著。表明:外源基因的导入并未增强抗虫耐除草剂棉花的生存竞争能力,因此,抗虫耐除草剂棉花无杂草化风险。     

152个黄淮地区小麦主要品种(系)的多抗性鉴定

为给小麦抗病抗虫育种提供依据,于2004～2006年在山东济南对152份来自黄淮地区的小麦主栽品种(系)进行了抗小麦条锈病、叶锈病、白粉病及蚜虫鉴定.结果表明,在供试品种(系)中表现高抗条锈病的品种(系)占46.71%,中抗品种占25.66%;高抗叶锈病的品种占23.68%,中抗品种占24.34%;高抗白粉病的品种占28.29%,中抗品种占55.92%;高抗蚜虫的品种(系)占5.26%,中抗品种占13.16%.综合来看,对小麦条锈病、叶锈病和白粉病表现中抗以上的品种(系)47个,占30.92%;兼抗(中抗以上)小麦条锈病、叶锈病、白粉病和麦蚜的有5个品种(系),占3.29%.     

不同抗性玉米品种接种甘蔗花叶病毒(SCMV)后4种防御酶活性变化研究

 植物在长期进化过程中,不断抵御外部伤害,包括有害生物的入侵,其体内逐渐形成了一套完整的保护机制。     

转Bt基因玉米对根际土壤细菌遗传多样性的影响

连续两年在田间自然状态下,采用PCR-DGGE方法研究6个不同生育期种植转Bt基因玉米MON810对根际土壤细菌群落遗传多样性的影响。结果表明,2008年,同一生育期内转Bt基因玉米与非Bt基因玉米根际土壤细菌16S rDNA DGGE指纹图谱相似,细菌群落的遗传物质组成差异不显著,仅在抽丝期和乳熟期Bt玉米出现两条差异条带。2009年,苗期、拔节期、喇叭口期、抽雄期4个生育期两种玉米出现差异条带,抽丝期和乳熟期无差异条带。对DGGE图谱条带进行克隆测序,部分图谱中的条带所代表的DNA序列相同,最终得到51条DNA序列,共涉及主要细菌门类8个,典型差异条带分别属于芽单胞菌门（Gemmatimonadetes）、变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）。总体来看,与不同品种相比,不同生育期、不同年份间细菌群落差异更为显著,Bt蛋白的积累对根际细菌群落变化有一定影响。     

抗除草剂转基因大豆对田间节肢动物群落多样性的影响

采用直接观察法调查了大豆田间节肢动物群落的多样性,分析比较了节肢动物群落、天敌亚群落和害虫亚群落的多样性指数、均匀性指数、优势集中性指数,研究了抗除草剂转基因大豆对田间节肢动物群落多样性的影响。结果表明,在大豆生长期间,抗除草剂转基因大豆与受体大豆间各指数均无显著性差异。因此,转基因抗除草剂大豆对田间节肢动物群落多样性无明显影响。