奶牛乳腺上皮细胞的克隆与特性分析

用组织块接种法分离培养奶牛乳腺上皮细胞,进行形态学观察、生长曲线的绘制和核型分析等生物学性状的检测,并进行酪蛋白基因的RT-PCR鉴定。结果显示,体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长旺盛,具有典型的上皮细胞形态特征;染色体数目为60;能够正常表达奶牛乳腺上皮细胞的2种特异性酪蛋白基因,即as1-酪蛋白基因和β-酪蛋白基因。表明成功获得了奶牛乳腺上皮细胞克隆。     

胸膜肺炎放线杆菌血清8型自转运黏附素基因的克隆测序及功能预测分析

为研究胸膜肺炎放线杆菌(APP)三聚体自转运黏附素(TAAs)的功能,以GenBank登录的APP血清5b型自转运黏附素基因5'端的3875bp序列设计引物,通过PCR的方法首次获得APP血清8型运黏附素N端的基因序列片段,测序结果与已知血清型的基因序列和氨基酸推导序列分别进行比对,结果表明与血清7型自转运黏附素N端同源性达到93%,氨基酸推导序列同源性达到97%;与血清5b型自转运黏附素N端同源性达到92%,氨基酸推导序列同源达到100%.经软件分析获得的序列含有与细菌的黏附、聚集和侵入密切相关的Hep_Hag基序,应用马克斯-普朗克研究所的在线分析TAAs的基序和蛋白域的软件daTAA,进行预测并证明所得序列为TAAs,并且具有完整的N段头部序列,有重要功能区具有良好的抗原性.比对的结果为寻找研究APP的定植基序和毒力因素提供了重要基础.     

动物源性大肠杆菌耐药性分析

目的:对吉林省长春市伊通地区分离出的113株动物源性大肠杆菌耐药性进行分析,了解猪源和鸡源大肠杆菌耐药程度及其耐药谱。方法:采用K-B纸片扩散法对大肠杆菌耐药性初步定性分析,并从中选出十株耐药谱不同的大肠杆菌测定其抗生素的最小抑菌浓度(MIC)。结果:113株均表现出不同程度的耐药,耐药谱广,且多表现为多重耐药。结论:动物源性大肠杆菌对抗生素的耐药性以多重耐药为主。113株对喹诺酮类、磺胺类、利福平耐药率达到90%以上,其中鸡源、猪源大肠杆菌耐药情况各不相同,二者均对丁胺卡那霉素、先锋必/舒巴坦较敏感,耐药率低于15%,可知丁胺卡那霉素、先锋必/舒巴坦可作为这些地区防治致病性大肠杆菌的首选药物。本实验结果对临床科学合理用药有重要指导意义。     

IGF-Ⅰ对奶牛乳腺上皮细胞合成乳脂、乳蛋白的影响

分离培养奶牛乳腺上皮细胞,添加不同质量浓度的IGF-Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ）（0,10,100,200μg/L）刺激24h后,提取细胞总RNA,用荧光定量RT-PCR方法检测β-酪蛋白（CSN2）和乙酰辅酶A羧化酶α（ACA-CA）基因的转录水平变化。结果显示,IGF-Ⅰ能够显著促进CSN2和ACACA基因的转录,并且具有浓度依赖性。结果表明,IGF-Ⅰ可作为信号分子调节乳腺的泌乳功能。     

香芪口服液对大肠杆菌耐药抑制作用

通过香芪口服液对耐药大肠杆菌作用前后环丙沙星和庆大霉素最小抑菌浓度测定、质粒图谱分析以及外膜蛋白图谱分析,研究香芪口服液对耐药大肠杆菌的体外耐药性的抑制作用.结果表明:中药作用后,大肠杆菌对环丙沙星和庆大霉素最小抑菌浓度无变化;中药作用后的大肠杆菌的质粒图谱部分质粒消失,1号菌株ompA恢复表达,2号菌株ompF恢复表达;此中药与大肠杆菌质粒拷贝、恢复外膜通道蛋白的正常表达有密切关系,为今后耐药抑制剂的研制奠定理论基础.