12个新城疫病毒分离株的F基因和HN基因序列分析

自1997年-2016年从广东佛山、肇庆、云浮等地疑似新城疫的家禽病料分离鉴定获得12株新城疫病毒,采用RT-PCR方法对所有分离株的F基因和HN基因进行扩增,产物经克隆并测序后与GenBank数据库中的参考毒株做遗传进化分析。12个分离株的F基因遗传进化分析结果显示,9株属于基因Ⅶ型,2株属于基因Ⅸ型,1株属于基因Ⅵ型。F基因同源性分析结果显示,12个毒株与目前疫苗株La Sota、B1、Mukteswar和Clone30的同源性在81.6%~91.5%之间,12个毒株间同源性的差异较大,9个Ⅶ型分离株之间的同源性在84.8%~99%之间;HN基因同源性分析结果显示,12个毒株与目前疫苗株La Sota、B1、Mukteswar和Clone30的同源性在80.9%~91.9%之间,12个毒株间同源性的差异较大,9个Ⅶ型分离株之间的同源性在84%~98.5%之间。氨基酸序列分析表明,12个分离株与NDV强毒株的氨基酸特征相符,有10个分离株的HN基因第514氨基酸残基出现Ⅰ→Ⅴ的变异,有9个分离株的F基因和HN基因的中和抗原位点出现变异。试验提示,当前广东部分地区的分离株与传统疫苗株之间存在抗原性差异,故应加强广东地区新城疫病毒的分子遗传监控。     

1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒分子进化分析及对鹅的致病性

从广东地区鹅群采集的咽喉拭子中分离到1株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)并命名为A/Goose/Guangdong/A11/2016(H9N2)(GS/A11)。采用RT-PCR方法扩增出病毒的全基因片段,并进行序列比较及遗传进化分析。推导氨基酸序列分析表明,GS/A11的HA蛋白裂解位点序列为333PSRSS↓GL340,无连续碱性氨基酸,符合低致病性禽流感特征;GS/A11上的Q226L突变提示结合人α-2,6唾液酸受体的能力增加;M2蛋白中出现了与金刚烷抗性相关的S31N突变。基因遗传进化树分析显示,分离株病毒为三元重组基因型。为了解H9N2亚型对鹅的致病性,以106×EID50剂量经静脉注射6周非免疫鹅,攻毒显示,攻毒鹅无明显临床症状,仅表现为局部器官感染,可经喉气管和泄殖腔排毒。研究提示,该株H9N2亚型AIV对鹅无明显致病力,但感染后可持续排毒。该现象为流感病毒在鹅及其他禽类中流行并发生基因重组提供了机会,故应加强鹅H9N2亚型AIV的检测及分子遗传的演变监控。     

H7N9亚型禽流感油乳灭活苗诱导鸭产生HI抗体的研究

为了解H7N9亚型禽流感油乳灭活苗对不同品种鸭诱导免疫应答的基本能力和不同接种方法诱导各种鸭产生HI抗体的情况,试验采用H7N9亚型禽流感油乳灭活苗对4个品种(番鸭、白鸭、水鸭、麻鸭)的雏鸭进行3种不同程序的免疫试验(2周龄肌肉注射0.3 mL/只为程序1,2周龄肌肉注射0.5 mL/只为程序2,2周龄肌肉注射0.3 mL/只、3周龄肌肉注射0.6 mL/只为程序3)。结果表明,程序1免疫的雏鸭可在免疫后2周产生4.09~5.73 log_2HI抗体,免疫后1~8周均值为4.54~7.03 log_2;程序2免疫的雏鸭可在免疫后2周产生4.20~6.27 log_2的HI抗体,免疫后1~8周均值5.53~6.57 log_2;程序3免疫的雏鸭可在免后2周达到4.91~7.36 log_2,免疫后1~8周均值6.31~7.87 log_2。结果提示,该疫苗对4种鸭都具有良好的免疫原性,免疫后可较快地产生较高水平的抗体,且维持较长时间(8周以上),同时初步建立了鸭H7N9亚型禽流感油乳灭活疫苗的基本免疫程序。     

4株鸭圆环病毒全基因组克隆与遗传进化分析

通过对广东佛山、中山等地出现以脱毛,皮肤潮红,生长缓慢为特征的樱桃谷商品肉鸭群的病鸭组织进行病原检测,初步诊断为鸭圆环病毒(DuCV)感染。采用常规PCR方法,扩增出4株DuCV的全基因序列,并进行序列比较及遗传进化分析。结果显示:4株DuCV全基因与德国株AY228555,广西株KC460527、KC460530、KC460532、KC460535属于同一进化分支,同源性为94.8%～99.3%,均属于DuCV-1型;而与DuCV-2型代表株台湾株AY394721的同源性为82.9%～83.4%。该研究为鸭圆环病毒感染的监控和诊断提供了依据。     

鼠伤寒沙门菌人工感染鹅的病理组织学观察

为研究鼠伤寒沙门菌感染鹅的病理组织学变化,采取肌肉注射鼠伤寒沙门菌的方法,人工感染58日龄健康鹅,对试验鹅进行病理剖检,并采取心脏、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、脑、胰腺和肠道病料制作病理切片,观察病理组织学变化。结果可见,受感染鹅18 h内开始出现死亡,死亡率达66.7%;主要病理变化为皮下、心肌、肝脏、脾脏、肠道、脑膜等多组织器官多处充血、出血,肝脏实质肿胀,表面可见大量大小不一的雪花状坏死灶,胆囊、脾脏肿大;病理组织学变化为心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肠道等多组织器官的细胞变性、坏死,大量红细胞及炎性细胞浸润。研究结果表明,鼠伤寒沙门菌感染鹅,致病性强、死亡率高,感染鹅可出现全身多组织器官充血、出血与组织细胞变性、坏死的急性败血症。     

1例鸡源血清4型禽腺病毒感染的实验室诊断

本研究从广州番禺某鸡场送检病死鸡中分离获得1株疑似Ⅰ群禽腺病毒。病鸡剖检以心包积液、肝脏呈土黄色并伴有出血点,肾脏肿胀、出血为主要特征。实验室通过血凝试验、PCR鉴定、序列测定及遗传进化分析、动物回归试验、病理组织学观察等进行一系列检测。结果显示,该毒株不能凝集鸡红细胞,根据FAdV的六邻体(Hexon)基因设计引物,进行PCR扩增和单克隆测序,PCR扩增出分子量约为550bp的特异性条带,通过序列测定和遗传进化分析表明,该分离病毒株与FAdV-4的相似性最高。同时用该分离毒株的鸡胚尿囊液感染28日龄雏鸡,试验鸡可复制出与临床相似病例,病理组织学观察可见,心肌细胞有炎性细胞浸润,肝内有嗜碱性包涵体等病变特征。综上,分离株B13为Ⅰ群FAdV-4。     

水禽源沙门菌的分离鉴定与PFGE分子分型

为了明确目前广东省水禽源沙门菌的优势血清型及其分子流行病学动态,采用细菌分离纯化、生化特性鉴定和PCR扩增从316份样品中分离鉴定出188株水禽源沙门菌;采用玻片凝集法将分离株分为4(B、D、C1、E1)个群别8种血清型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型法对分离株进行分子分型,得到PFGE-XbaⅠ带型62种,菌株间相似度为54.1%~100.0%,分为A^I共9个聚类簇与11个单一基因型。结果表明,广东水禽源沙门菌优势血清型为鼠伤寒沙门菌,PFGE-XbaⅠ带型具多样化,其中11种PFGE-XbaⅠ带型在区域和年份小范围集中流行,32种带型跨区域与跨时间交叉分布呈散在"流行暴发",不同血清型分离株的PFGE-XbaⅠ带型差异较大,相同血清型的分离株PFGE-XbaⅠ带型一般具有相同图谱型或聚类在一起。本研究采用PFGE法进行分子分型分析具有流行病学意义,并探明了本地沙门菌分离株血清型与分子分型的关系。