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广东地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及双重PCR检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
对来自广东地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病鸭组织进行了病原菌的分离培养和生化鉴定,确定得到20株鸭疫里默氏杆菌,动物回归试验结果表明,分离的鸭疫里默氏杆菌具有很强的致病性.对这20株鸭疫里默氏杆菌进行的药敏试验表明,分离株已广泛产生耐药性.参照已经发表的2对引物以细菌全菌体为模板建立双重PCR方法,结果均能扩增出2条目的片段,经测序证实为鸭疫里默氏杆菌,而对鸭源大肠杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门菌和鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性.说明建立的双重PCR方法能快速、准确的检测出鸭疫里默氏杆菌,并具有高度特异性,可用于鸭疫里默氏杆菌的快速鉴定和快速诊断. 相似文献
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根据GenBank中流感病毒H3N2亚型HA、NA、NP基因序列,分别设计扩增HA、NA、NP基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增猪流感病毒(SIV)H3N2济南株(SW/SD/JT/07(H3N2))HA、NA、NP基因,分别将RT-PCR产物克隆入pMD18-T栽体,进行测序分析.结果显示,SW/SD/JT/07(H3N2)HA基因长度约为1701 bp,编码566个氨基酸,与参考毒株的同源性为65.2%~81.8%;HA0切割位点序列为PENQTR↓G,属非高致病性毒株;SW/SD/JT/07(H3N2)HA蛋白有7个糖基化位点,由于碱基突变缺少了1个糖基化位点,表明其抗原性及其生物学特性发生变化.SW/SD/JT/07(H3N2)与所有参考毒株HA蛋白上的受体结合位点的氨基酸很保守,即98、134、136、138、226位分别为Tyr、Gly、Ser、Ala、Asn.SW/SD/JT/07(H3N2)NA基因长为1413 bp.编码470个氨基酸,与参考毒株的同源性为65.1%~91.8%,NA基因系统发生分析表明SW/SD/JT/07(H3N2)与禽流感病毒H3N2亚型亲缘关系最近.SW/SD/JT/07NA(H3N2)NA蛋白与参考毒株的颈区63、64、65位置均无氨基酸缺失现象,可推测其对病毒的复制能力不会有很大影响.SW/SD/JT/07(H3N2)NP基因长为1565 bp,编码498个氨基酸.与参考毒株的同源性为79.8%~87.8%,NP基因系统发生树分析结果表明,2002年、2004年暴发的西班牙流感同源性较高,亲缘关系较近,而与中国内地广东株同源性小,亲缘关系较远. 相似文献
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山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测 总被引:2,自引:0,他引:2
为了解山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因分布情况,对2004~2011年间分离的230株禽源致病性大肠杆菌进行了qnrA、qnrB、qnrS基因的PCR检测,结果发现未检出qnrA和qnrB,qnrS基因的检出率为25.22%(58/230)。对部分检出的qnrS基因测序后发现假阳性率较高(8/24),为了提高检测的特异性,建立了检测qnrS基因的套式PCR,测序结果表明该方法检出准确率为100%,使用该方法检出230株细菌中qnrS基因的携带率为16.52%(38/230),表明含qnrS基因的耐药质粒在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛。 相似文献
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为获得鸡C3d基因的eDNA,从鸡肝细胞提取总RNA,通过RT—PCR扩增出C3d基因的eDNA,脂糖凝胶电泳鉴定后直接克隆到pMD18-T载体,构建C3d—pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。通过琼脂糖凝胶电泳证明有1.0kb左右的PCR扩增片段,序列测定表明为C3d基因的cDNA。通过RT—PCR法从鸡肝细胞RNA中成功地扩增到鸡C3d基因的cDNA,为进一步构建基于C3d基因内佐剂的疫苗奠定了基础。 相似文献
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某种鸭场饲养樱桃谷种鸭2000套,饲养至2月龄时开始发病,经诊断后采取措施.使病情得到了控制。临床诊断发病情况:1998年1月,某种鸭场在建场尚未完工之际,便引进2000套樱桃谷种鸭进行饲养。场内建设仍在进行,进入鸭舍的各个人口处无消毒池及其他消毒设施,饲养人员管理较混乱,常规免疫程序未严格执行。饲养至2月龄时,饲料由成品料改为自配料,2天后鸭群开始零星发病,出现死亡,其间气温降低,出现阴雨连绵天气。1周后,病情迅速蔓延,发病率超过30%,死亡率达10%。对病鸭使用青、链霉素等药物后疗效不明显。临床症状:病鸭表现为… 相似文献
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通过PCR方法自含NDVZF基因的克隆质粒中扩增NDVF基因 ,将其与真核表达载体pcDNA3..1/V5_His_TOPO重组。经核酸内切酶酶切 ,阳性克隆鉴定准确无误 ,核酸序列测定结果与原始基因比较 ,同源性大于 99% ,启始密码和终止密码未出现变异 ,将该重组质粒命名为pcDNANDVZF。将pcDNANDVZF在脂质体作用下转染CEF细胞 ,用间接免疫荧光试验检测 ,结果证明pcDNANDVZF可在CEF细胞中大量表达F蛋白。 相似文献
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计算机图像处理系统在微生物显微观察及图片采集方面的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
显微镜的发明 ,突破了人类的生理限制 ,使人们看清了细菌和细胞 ,随着生物医学显微技术的高速发展 ,起步较晚的农业显微技术尤其是兽医显微技术也得到了高速的发展。但是在常规光学显微镜条件下进行微生物和细胞观察、细菌计数时 ,由于长时间、连续进行相同的视觉处理 ,人往往感到单调、疲劳、厌倦、甚至遗忘 ,从而产生较大误差。在进行显微摄影时 ,由于曝光时间不易控制、调焦取景等都需要有经验的人员操作 ,成功率较低。随着计算机技术的飞速发展 ,出现了显微镜和计算机相结合的产物 ,在国外一些大公司生产的新型显微镜上都配有计算机图像… 相似文献
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传染性腺胃炎发病鸡中MDV REV CAV共感染的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
近年来我国出现了一种临床上以病死鸡消瘦或高度消瘦、腺胃高度肿胀为特征的传染病 ,给养禽业生产带来了巨大损失。荷兰学者 Kouwenhoven B等将临床有如此特征表现的流行病暂称为传染性腺胃炎 (infectious proventriculitis,IP) [1] ,目前这一命名逐渐地为我国学者所接受 ,但对引起该病的病因却众说不一 [2~ 8]。利用核酸探针技术我们对临床有上述特征发病表现的自然发病鸡群采集的病料进行了马立克氏病病毒 (MDV)、网状内皮细胞增生病病毒(REV)、鸡传染性贫血病病毒 (CAV)感染的检测 ,以助于探明该病的病因。1 材料与方法1.1 病料的收集与处理 从山东、河南、北京等地10个不同鸡场收集临床有发病表现的 6 6只病、死鸡的肝脏、脾脏、心脏、肾脏、胸腺、腺胃、法氏囊或羽毛囊等。按常规方法提取各组织的基因组 DNA,同时提取 SPF鸡 (由山东济南斯帕法斯 SPF鸡场提供 )的组织 DNA作阴性对照。1.2 用斑点杂交法对 MDV、CAV、REV进行检测1.2 .1 DNA含量的测定 取一定量板 (1%琼脂糖凝胶 适量溴化乙锭 ) ,用 DL2 0 0 0 Marker... 相似文献