无乳链球菌dnaJ基因缺失株的构建及其致病性研究

为研究dnaJ基因序列与细菌致病力的关系,本研究构建了dnaJ基因缺失株和互补株,并对其致病性进行验证。参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号:NC_018646)目的基因序列分别设计引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通过融合PCR将两个片段连接到一起,构建dnaJ基因上、下游同源臂融合片段,PCR克隆含有启动子序列的dnaJ基因。将dnaJ基因上、下游同源臂融合片段和含有启动子序列的dnaJ基因分别连接链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET4s和pSET2,电转化GD201008-001感受态细胞,构建dnaJ基因缺失株ΔdnaJ和互补株CΔdnaJ。通过分析ΔdnaJ和CΔdnaJ的遗传稳定性与形态学变化对dnaJ上、下游基因转录的影响,以及生长速率和斑马鱼攻毒试验评价dnaJ基因对无乳链球菌毒力的影响。经PCR鉴定和测序证明,ΔdnaJ和CΔdnaJ构建成功;与野生株GD201008-001相比,ΔdnaJ和CΔdnaJ在细菌染色形态上均无明显差异,但ΔdnaJ在液体培养基中的生长速度明显减缓;dnaJ基因的缺失未对相邻基因的转录造成影响;ΔdnaJ对斑马鱼的毒力明显下降,对斑马鱼的LD_(50)为5.68×10~4 CFU,约是野生株的241倍。dnaJ基因对无乳链球菌的毒力有显著影响,本试验结果为进一步探究无乳链球菌dnaJ基因的功能提供了参考依据。     

高聚合度菊粉通过调节肠-脂肪组织轴改善高脂饮食诱导的犬肥胖

旨在基于肠-脂肪组织轴研究高聚合度菊粉改善高脂饮食诱导犬肥胖的作用机制。试验选取40只贵宾犬，随机等分为5组：正常饲粮组、高脂饲粮组和高聚合度菊粉低剂量组、中剂量组及高剂量组。正常饲粮组饲喂正常饲粮，高脂饲粮组饲喂高脂饲粮，高聚合度菊粉低剂量组、中剂量组及高剂量组分别饲喂含1.0%、3.0%和5.0%高聚合度菊粉的高脂饲粮，试验期为12周。试验结束后，测定血清糖脂和炎症因子含量，分别用实时荧光PCR检测和Western blot检测皮下脂肪组织和结肠黏膜中相关因子的mRNA相对表达和蛋白相对表达。结果表明：高聚合度菊粉可有效降低高脂饮食犬的体重、体脂率和血脂水平，改善糖耐量受损，提高结肠黏膜中闭锁蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的mRNA与蛋白表达量，降低血清脂多糖(LPS)、IL-6和TNF-ɑ水平以及脂肪组织中IL-6和TNF-ɑ蛋白表达。综上所述，高聚合度菊粉对高脂饮食诱导犬肥胖具有改善作用，其作用机制可能与调节“肠黏膜屏障功能-LPS易位-脂肪组织炎症”这一肠-脂肪组织轴有关。     

2009—201O年江苏中部地区部分种猪场主要疫病流行病学调查

对江苏中部地区部分种猪场进行现场走访、采集血清样品和病料样品分别作血清学检测和病原学检测,结果显示猪瘟、猪呼吸与繁殖障碍综合征、猪圆环病毒2型感染、猪伪狂犬病、猪细小病毒感染、猪传染性胸膜肺炎、猪链球菌病、猪大肠杆菌病普遍存在,各地差异较小。     

2009-2010年江苏中部地区部分种猪场主要疫病流行病学调查

对江苏中部地区部分种猪场进行现场走访、采集血清样品和病料样品分别作血清学检测和病原学检测,结果显示猪瘟、猪呼吸与繁殖障碍综合征、猪圆环病毒2型感染、猪伪狂犬病、猪细小病毒感染、猪传染性胸膜肺炎、猪链球菌病、猪大肠杆菌病普遍存在,各地差异较小。     

鸡新城疫与大肠杆菌病混合感染的诊治

2010年5月,笔者解剖了泰州市某鸡场送检发病鸡、病死鸡9只,发现6只均出现以肝周炎、气囊炎、肌胃角质层下有点状或片状出血,腺胃乳头、直肠和泄殖腔出血,气管喉头有大量粘液为主要病理变化,采集病料进行细菌和病毒分离和鉴定。细菌分离试验结果显示其生长特点、形态特征、生化试验均符合大肠杆菌的特点。同时,将处理好的病料接种9日龄非免疫鸡胚,做HA、HI试验,结果显示病毒的血凝特性能被抗新城疫病毒阳性血清所抑制,表明从病料中分离出了新城疫病毒。由此可断定,该鸡群混合感染了新城疫病毒和大肠杆菌。     

环糊精包合氟苯尼考在猪体内的药代动力学研究

为评价采用新包被工艺生产的氟苯尼考（受试制剂F）与国外同类产品（R1）、国内同类产品（R2）在猪体内的生物等效性并探索其药代动力学特性,本试验采用随机三制剂、三周期自身交叉试验设计,选取6头健康的阉割小公猪（体重15 kg±2 kg）,分别灌胃给药3种制剂,给药剂量为20 mg/（kg·BW）,采用高效液相色谱法测定血浆中氟苯尼考浓度,利用Kinetica 5.0软件分析药代动力学特性,SAS统计软件进行生物等效性评价。结果显示,受试制剂在猪体内的药时曲线符合带时滞的一级吸收一室开放模型,F、R1、R2的峰浓度（C_max）分别为16.0845、18.3287和21.1678 μg/mL,药物达峰时间（T_max）分别为5.0、1.9、1.5 h;药-时曲线下面积_（0-∞）（AUC_0-∞）分别为144.7327、118.2670和123.3715 μg/mL·h;受试制剂相比于两种参比制剂的相对生物利用度分别为122.51%（R1）和117.52%（R2）。结果表明,环糊精包被氟苯尼考有更好的缓释作用,具有更好的生物安全性,药效维持时间长,生物利用度有效提高。     

复方中草药添加剂对林下生态鸡生长性能和免疫功能的影响

本试验旨在研究复方中草药添加剂对林下生态鸡生长性能和免疫功能的影响。将200只28日龄的林下生态鸡随机分为4组,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别按日粮的0.5%、1%、2%添加复方中草药制剂,空白组不添加任何药物,测定各组的生长性能、新城疫HI抗体水平、免疫器官指数及淋巴细胞转化率。结果表明,按1%、2%添加复方中草药能显著提高林下生态鸡的生长性能和成活率,显著提高HI抗体水平,延长持续时间,促进免疫器官的生长发育,显著提高淋巴细胞转化率。     

分枝杆菌Hsp70对PCV2 Cap蛋白的免疫佐剂作用研究

为了研究分枝杆菌热休克蛋白(Hsp70)对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的免疫佐剂作用,以自聚肽ELK16为纯化标签,分别与Hsp70和PCV2 Cap基因融合后诱导表达,利用离心洗涤法进行融合蛋白纯化,获得了纯化的融合蛋白ELK16-Cap、ELK16-Hsp70和ELK16-Cap-Hsp70,其纯度高达95%、96%和85%,产量分别为92、84和83 mg/L;接着用PBS、ELK16-Cap、ELK16-Cap+弗氏不完全佐剂(IFA)、ELK16-Cap+ELK16-Hsp70和ELK16-Cap-Hsp70分别免疫小鼠,初免后21 d ELK16-Cap-Hsp70免疫组抗体水平达到最高;在二免后2周取免疫小鼠脾脏淋巴细胞,用试剂盒检测细胞因子表达,TNF-α浓度依次为588.55、802.55、995.55、1 382.55和1 719.55 pg/mL,IFN-γ浓度依次为46.30、92.22、155.56、470.37和518.15 pg/mL,IL-12浓度依次为14.72、28.06、20.83、31.39和34.72 pg/mL。这些研究结果表明,Hsp70对刺激PCV2 Cap蛋白ELISA抗体产生的作用优于IFA,但两者融合蛋白的刺激作用较强;与Cap蛋白融合的Hsp70对刺激TNF-α、IFN-γ和IL-12产生的作用较强,而ELK16-Hsp70+ELK16-Cap对3种细胞因子产生的刺激作用次之。     

江苏中部地区3个种猪场主要疫病的调查及应对方略

为了解江苏中部地区种猪场主要疫病流行情况,笔者于2010年对泰州1个种猪场、滨海2个种猪场进行现场走访、采集血清样品和病料样品分别作血清学检测和病原学检测,为下一步猪群疫病的防制决策提供科学依据.报告结果如下.