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非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究 总被引:12,自引:6,他引:6
用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72 基因的重组杆状病毒(Bacp72)作载体,在sf9细胞中表达并得到重组P72蛋白,SDS-PAGE可得到分子量在 72kDa左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 P72蛋白进行 ELISA检测,证明该蛋白具有生物学活性。用P72作为间接法的包被抗原,对ELISA反应条件进行了优化。确定最佳包被液为PBS(pH7.2)、最佳封闭液为1%PCT、最佳血清稀释液为4%PEG6000/PBS、最佳冲洗液为0.5M NaCl/0.5%Tween-20/PBS(pH7.2)。本实验反应体系采用50μl的微量法,可节约试剂及抗原。反应在2小时内即可完成,达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于-20℃的冰箱中,至少可以保存5个月。阻断试验和交叉试验表明ELISA法有良好的特异性。间接ELISA比Dot-ELISA法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果,与我国实际情况相符。用Bacp72表达的非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原作为间接ELISA的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ELISA检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。 相似文献
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