黄瓜高效遗传转化体系的建立及银杏抗菌肽转化

建立黄瓜的高效再生和遗传转化体系,并进行银杏抗菌肽GK-2的遗传转化。研究结果表明,MS6(MS+0.005 mg/L TDZ+0.20 mg/L IAA)培养基适于黄瓜愈伤组织的形成和不定芽分化,7 d即可分化出不定芽,出愈率和分化率分别高达100%和86.67%。进一步用带有银杏抗菌肽GK-2目的基因的农杆菌转化黄瓜,筛选出了侵染时间20 min、共培养时间3 d以及卡那霉素抗性筛选质量浓度为100 mg/L的最佳转化体系。利用该体系转化黄瓜,获得的转化植株阳性率高达17.9%,并对黄瓜枯萎病表现出明显的抗性。     

小麦叶绿体果糖 1, 6 二磷酸醛缩酶活性的测定方法及应用

高等植物中的果糖1,6二磷酸醛缩酶（FBA）在叶肉细胞的叶绿体中高效表达，可逆催化卡尔文循环中果糖1, 6 二磷酸（FBP）和景天庚酮糖1, 7二磷酸（SuBP）的合成反应，在各种非生物胁迫的逆境条件下，FBA会表现出不同的响应。为了测定小麦叶绿体FBA (CpFBA)的活性，进一步研究小麦中CpFBA的功能，本研究比较了两种酶活性测定方法：一种方法是根据FBA催化FBP分解的过程中NADH转化为NAD⁺的量来确定FBA的活性；另一种是利用谢利万诺夫试剂（Sediwanoff reagent）与酮糖FBP作用生成鲜红色复合物，根据OD₅₂₀的变化测定FBA的活性。在此基础上，测定了两个小麦材料在4℃低温处理过程中CpFBA活性的变化。结果表明，谢利万诺夫试剂法对于测定小麦叶绿体FBA活性较为可行。CpFBA酶活性受到温度的影响，随着处理时间的延长，在35 d内两个材料的FBA酶活都呈现升高降低升高的交替变化，相比较而言，对低温不敏感的小麦矮变1号相对稳定，对低温敏感的返白系小麦出现先升高后又逐渐降低的趋势。     

陕西省部分小麦栽培品种高分子量麦谷蛋白亚基组成及其与品质关系

本研究以36个陕西省主要栽培品种为材料,利用SDS-PAGE方法分析了高分子量麦谷蛋白亚基组成,并对其SDS沉淀值进行了测定,分析了高分子量麦谷蛋白亚基组成与代表面包烘烤品质的SDS沉淀值间的关系.结果表明:Glu-1位点存在着广泛的等位基因变异,在所分析的36个品种中,Glu-A1位点亚基1出现频率最高,为63.9%;Glu-B1位点等位基因变异最丰富,其中亚基7 8和7 9出现频率最高,其次为亚基14 15;Glu-D1位点亚基组成以2 12为主;对各位点品质评分与SDS沉淀值的简单相关分析结果表明各位点品质评分与SDS沉淀值均存在着显著或极显著相关关系,各位点影响大小依次为Glu-D1＞Glu-A1＞Glu-B1;Glu-1品质评分与SDS沉淀值极显著正相关.     

用SSR分子标记检测杂交油菜秦优7号的种子纯度

杂交油菜中的主要杂株类型是母本不育株和父本恢复株。通过对100对SSR引物筛选,获得1对可将杂交油菜秦优7号及其父母本区分开来的SSR引物SA82,扩增产物杂交种表现为父母本的互补带型,在30 g/L的琼脂糖凝胶上显带清晰稳定。通过简化油菜DNA提取方法、优化反应体系、重复使用琼脂糖凝胶等,建立了适用于杂交油菜秦优7号种子纯度检测的SSR技术系统。经对大量油菜杂交种个体进行验证,证明该方法具有很好的重复性、准确性和可靠性,同时具有快速、经济的特点,可用于杂交油菜种子纯度的实际检测。     

圆锥小麦ramosa2的克隆及其重组蛋白的DNA结合特性分析

 【目的】从四倍体圆锥小麦中克隆ramosa2(TtRa2),分析其序列特征、组织表达特异性和体外活性,为阐明ramosa2与麦类作物穗形态建成关系奠定基础。【方法】利用半定量RT-PCR分析ramosa2在不同组织中的表达水平,将其重组到pET-21a-MBP载体并在T7 Express菌株中诱导表达。利用Amylose亲和层析柱纯化重组蛋白,通过凝胶阻滞试验对其DNA特异结合能力进行鉴定。【结果】TtRA2含有LOB和RA2结构域,属于Ⅰ类LBD蛋白家族成员。TtRa2在幼穗中高丰度表达,而在根、茎、叶、种子中未检测到表达。融合的TtRA2主要以可溶性形式存在,其表达量占总蛋白的68.6%。重组TtRA2可与包含核心序列“GCGGCG”的DNA探针特异性结合,两者形成的复合体的解离常数约为10 nmol?L-1。【结论】TtRa2参与圆锥小麦穗形态建成,其编码产物具备RA2-like转录因子的典型特征,具有类似拟南芥LOB的DNA结合特性。     

农杆菌侵染小麦的优化方案

本实验选用优质高产小麦品种洛阳8716和绵阳19幼胚愈伤作为受体材料,以pCAMBIA3301为载体,GV3101,EHA105,LBA4404农杆菌为供体材料进行侵染过程的优化研究.采用3种菌株,4个浓度梯度:OD600=0.2,0.5,0.7,1.0;3个时间参数:10 min,30 min,60 min;一共36个处理,每个处理4个重复.结果显示,农杆菌GV3101和EHA105,OD600 1.0×10 min和OD600 0.5×30 min两个侵染处理结果比较好,瞬时表达率达到50%-70%.以小麦幼胚愈伤组织为受体,预培养3～5 d,在24±1℃下,共培养3～4 d和350 mg/L羧苄青霉素除菌及5 mg/L PPT筛选处理后,转化效果较好,平均转化率为0.45%.     

烟草DREB-like转录因子的克隆与鉴定

在NCBI网站BLAST得到5个烟草表达序列标签(EST),据此设计引物,从烟草(Nicotianabenthamiana)品种本塞母氏中分离出2条DREB(dehydration-responsiveelementbindingprotein)-like转录因子基因,分别命名为NbDREB1和NbDREB2。与相关AP2/EREBP类转录因子比对结果显示,NbDREB1和NbDREB2都具有典型的AP2/EREBP转录因子家族EREBP亚族A类AP2区特征,并且都能在大肠杆菌(Escherichiacoli)中表达。酵母单杂交结果显示,都不具有激活功能。连接pGADT7反式激活载体进行酵母单杂交结果显示:NbDREB1能与DRE顺式作用元件结合,NbDREB2则不能,表明NbDREB1为抑制型DREB类转录因子。比较NbDREB1和NbDREB2的AP2区发现:两者在第2位和第49位氨基酸处不同,NbDREB1为Y和K,NbDREB2为N和R。     

畜禽及环境中沙门氏菌的PCR快速检测与控制

本文运用PCR技术检测家畜及环境中的沙门氏菌,25种沙门氏菌均获得特异性扩增,3种非沙门氏菌检测结果为阴性。表明PCR技术具有快速简便、敏感高和特异性强等优点,值得在沙门氏菌的快速检测中推广应用。并简要介绍了沙门氏菌的相关控制措施。     

转hBMP-3m基因烟草的初步研究

重组人骨形成蛋白hBMP已在中国仓鼠卵巢细胞、昆虫等真核细胞和大肠杆菌等原核细胞表达系统中得到了表达[1,2].关于hBMP转化植物的研究国内外尚未见报道.     

小麦胆色素原脱氨酶的联合酶活法测定

本实验以小麦匀浆液中δ－的氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ（催化δ－氨基酮戊酸（ＡＬＡ）生成胆色素原（ＰＢＧ）,并以ＰＢＧ作为底物测定胆色素原脱氨酶（ＰＢＧＤ）的酶活,的结果表明：将ＡＬＡ缓冲液与粗ＡＬＡＤ酶液１：２混合,２５℃,黑暗反应４ｈ,可获得最大量的ＰＢＧ,加入部分纯化的ＰＢＧＤ,３７℃反应１ｈ后,测得底物ＰＢＧ减少,产物原尿卟啉原Ｉ增加,该联合酶活测定法以ＰＢＧ减少来直接确定加热处理后的凝胶过