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在猪IgA重链CH1-CH3区设计一对引物,用RT-PCR方法从地方杂交品种长白猪肠系膜淋巴结组织中扩增出预期大小的片断,插入pGEM-Teasy载体,测序并与约克夏猪、人及其他动物的IgA进行序列比较。随后,将该序列酶切后引入到pQE-30表达载体相应位点,转化JM109大肠杆菌,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE分析。结果显示,本研究克隆了猪IgA重链恒定区部分CH1亚区及完整的CH2-CH3亚区基因序列,全长822bp,编码274个氨基酸,该序列与GenBank上登录的约克夏猪参考序列核苷酸序列同源率为99.8%,有2处核苷酸变异,氨基酸序列的同源率为100%。但与人及其他动物显示从84%~51%不等的同源性;在大肠杆菌表达出约31ku的蛋白条带,表达量约占菌体总蛋白的32.3%。本试验为今后的IgA免疫功能研究及基因工程化检测试剂开发打下了基础。 相似文献
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