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真核表达载体构建表达PRV闽A株gE基因表位抗原编码区片段的重组质粒 总被引:2,自引:1,他引:1
根据伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的序列与身份种真核表达载体pPICZaA、pAcGP67A序列与特性分别设计了两对PCR引物。通过PCR方法扩增到了两端具有不同酶切位点的gE基因表位抗原编码片段。将这2个片段分别克隆到pPICZaA与pAcGP67A载体,转化大肠杆菌TOP10菌档及XL1-Blue菌株,获得了含伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的重组质粒pICZaA-FS与pAcGP67A-FS。序测定结果显示两个重组质粒中插入片段的大小与方向均正确。 相似文献
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根据GenBank中猪源输血传播病毒Ⅱ型(Swine torque teno virus genogroupⅡ,TTVⅡ)基因序列设计并合成了1对特异性引物,扩增468bp目的片段。将PCR扩增产物测序,结果与GenBank中猪TTVⅡ型基因序列同源性为95%。利用该方法对猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪链球菌、猪多杀性巴氏杆、猪霍乱沙门菌和大肠杆菌等病原核酸进行扩增,均无条带出现,表明该方法具有较高的特异性。该方法的灵敏性试验表明,最低能检测到10.2pg核酸。利用所建立的PCR方法检测来自我国华南地区192份临床样品,阳性率为21.4%(41/192)。 相似文献
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双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究 总被引:11,自引:0,他引:11
建立了检测伪狂犬病病毒(PRV)抗原的双抗体夹心ELISA,试验方法的最佳工作条件为:抗体包被量为5μg/孔,酶标抗体的浓度为1:200。对人工感染兔和自然感染猪的组织脏器检测,结果发现扁桃体,脑和肺的检出率最高,其次为心,肝,脾,肾等组织。 相似文献
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RT-PCR快速检测口蹄疫病毒 总被引:8,自引:0,他引:8
根据口蹄疫病毒VP1基因的序列,设计了1对引物,建立了检测口蹄疫病毒的RT-PCR方法。对FMDV各毒株检测,结果均为阳性,而对猪病毒性疾病相关病毒进行检测,结果均为阴性;检测19份已知阳性样品,检出率100%;与动物接种试验比较,符合率100%,证明该方法特异,与经典方法动物接种试验比较,其灵敏度提高100倍左右;对O3I3株的细胞毒进行检测,其敏感度达10个TCID50。初步结果表明所建立的RT-PCR技术可用于口蹄疫的诊断和流行病学调查。 相似文献
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6株猪O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆与序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因的序列,设计并合成了2对用于扩增VP1基因的引物。从组织中提取总RNA,首先用P1、P2引物对6株猪。型口蹄疫病毒进行RT—PCR扩增,获得1000bp的片段;再用P3、P4引物进行巢式PCR扩增,结果获得850bp的片段。将850bp的片段克隆到pMD18—-T载体中,通过PCR鉴定,将阳性重组质粒进行测序并分析。结果发现6株FMDV的核苷酸同源性为80.2%~99.4%,其推导的氨基酸序列同源性为86.9%~99.5%;构建遗传发生树,发现6株FMDV属于两个不同的基因型,其中的Shunde00、Sihui01、Shenzhen99、Fushan01株属一个基因型(与Hongkong93、广东86分离株属同一基因型);Guangzhou99、Shenzhen00株属另一个基因型(与UKG-12—2001株、JPN2000株属同一基因型)。通过对口蹄疫病毒VP1基因的测序与分析,了解其变异情况,为科学地防控FMD提供分子水平的依据。 相似文献
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仔猪暴发猪繁殖与呼吸道综合征 总被引:11,自引:3,他引:8
调查了1995年广东省3个猪场暴发的疫病,根据流行病学、临床症状、病理变化、人工感染试验,结合间接免疫荧光试验及电镜观察等实验室诊断,确诊为猪繁殖与呼吸道综合征。 相似文献
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伪狂犬病病毒(PRV)是α疱疹病毒属的一个成员,为伪狂犬病的病原,猪是伪狂犬病病毒的自然宿主,该病原一旦感染猪,则产生潜伏感染,其致死率随猪年龄的增加而降低。由于伪狂犬病的暴发引起畜牧业的巨大经济损失,许多国家都进行免疫接种预防该病,而该病在不同的国家地区危害不同,所造成的经济损失也不一样,另外各国的经济发展不平衡,因此对该病所采取的防制策略亦有所不同,文章综述了美国,日本,欧共体及其成员国之间对伪狂犬病采取的防制策略及取得的进展,并根据我国伪狂犬病的流行现状,提出了应采取的控制策略。 相似文献