猪圆环病毒2型DY株ORF2基因在Sf9昆虫细胞中的表达

本试验采用PCR方法扩增出完整的PCV2 ORF2基因,并将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1^TM中,获得重组转移载体pFast-ORF2,再将其转化DH10Bac感受态细胞,发生转座反应,通过抗性及蓝白斑筛选获得含有ORF2基因的重组杆粒,通过Cellfectin转染试剂介导将重组杆粒DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。用该重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,并通过间接免疫荧光法和Western blotting检测目的蛋白的表达。结果表明,ORF2基因在昆虫细胞中获得表达,表达的蛋白质可被PCV2阳性血清识别,这为进一步研究PCV2亚单位疫苗及诊断抗原奠定了基础。     

猪链球菌检测方法的研究进展

猪链球菌是一种重要的人畜共患病病原,对猪链球菌进行快速而特异性地检测,具有重要的流行病学意义和临床应用价值。文章分别对猪链球菌免疫学检测方法与分子生物学检测方法进行了阐述,并对未来的研究方向进行了展望。     

云南省某规模化猪场三种主要病毒抗体检测与分析

为了解云南省某规模化猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)、猪伪狂犬(PR)的免疫水平及感染状态,试验采用酶联免疫吸附测定试剂盒分别对各阶段猪群随机采集130份血清进行三种主要病毒性疾病抗体检测。结果表明,该猪场的猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)野毒的抗体阳性率分别为94.57%、86.96%和0%,猪伪狂犬病防控较好,猪瘟和蓝耳病防控存在一定的问题,应及时调整免疫程序,加强猪场管理,重视生物安全,稳定生产。     

鸭圆环病毒ORF3蛋白多克隆抗体的制备与应用

鸭圆环病毒(DuCV)感染引起淋巴细胞凋亡,其ORF3蛋白是唯一具有凋亡活性的病毒蛋白,但目前ORF3特异性抗体的缺乏限制了其生物学功能的深入研究。DuCV包含基因I型和基因II型两种基因型,利用软件分析两基因型ORF3同源性,选取保守性肽段进行多肽合成,并与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,多次加强免疫兔子,采集血清并纯化IgG后制备ORF3多克隆抗体。ELISA检测发现此抗体能特异性与ORF3保守肽段反应,并具有较高的效价,间接免疫荧光(IFA)显示此抗体能特异性识别两基因型ORF3蛋白,但并不能用于western blot检测,说明此多抗主要识别ORF3空间构象的表位。总之,我们成功制备了特异性识别两种基因型DuCV ORF3蛋白的抗体,为今后深入探究DuCV ORF3蛋白的生物学功能提供了良好的研究工具。     

猪链球菌2型枯草杆菌素样蛋白酶的截短表达及其免疫保护作用研究

为研究猪链球菌2型(ss2)截短表达枯草杆菌素样蛋白酶(C5a-1)的免疫保护特性,本研究选择其B细胞线性表位优势区(aa 91～aa 323)进行PCR扩增,克隆至pET32a载体中进行原核表达,并接种小鼠鉴定其免疫保护性.Westemblot鉴定结果显示,截短表达的sspA重组蛋白分子量约45.6 ku,能够与SS2阳性血清反应,具有良好的反应原性.将纯化的重组蛋白经3次免疫CD-1小鼠,攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率仅为菌体免疫所提供保护率的15％.本研究为利用该蛋白作为动物免疫制剂提供了实验数据.     

猪肺源致病性多重耐药大肠杆菌的分离鉴定和药敏分析

河南省某养殖场83例仔猪出现厌食、呼吸困难等症状,并伴随不同程度的腹泻,死亡率约为4.5%。为确定该养殖场猪只感染的病原菌,本试验于无菌条件下对感染猪只肺脏进行病原菌分离、药敏试验和16S rRNA序列分析。结果显示,本试验分离的病原菌为革兰阴性短杆菌,在麦康凯鉴别培养基上菌落呈粉红色圆形,生化反应显示其可发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖和麦芽糖;16S rRNA序列分析显示,病原菌与致病性大肠杆菌同源性为99%;药敏试验显示,该菌对苯唑西林、头孢噻吩、头孢吡肟、链霉素等23种抗菌药均有较强耐药性。本试验结果为肺源多重耐药大肠杆菌的鉴定和临床用药提供了有价值的数据支持。     

副产物乳酸对猪链球菌疫苗株ST171发酵的影响

为提高猪链球菌(S.suis)疫苗的高密度发酵效果,本研究对S.suis疫苗株(ST171)的发酵过程进行检测,利用外源添加试验研究乳酸对ST171发酵的影响,并通过对发酵工艺的优化减少乳酸的生成.结果表明,ST171发酵液中积累有大量对其生长及活菌数量有不利影响的代谢副产物乳酸.经优化确定ST171发酵的最优工艺参数为:溶氧水平20％,初始葡萄糖浓度10g/L,残糖浓度1g/L,最大比生长速率小于0.7 h-1.在优化条件下,发酵过程中乳酸生成量与原工艺相比降低了41.41％,菌体生物量和活菌数量分别提高了70.58％、129.09％,取得了良好的发酵效果.     

SS2溶菌酶释放蛋白(MRP)B细胞表位预测、原核表达及免疫学特性

运用ANTHEPROT 5.0综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数,预测MRP的B细胞优势袁位簇;PCR扩增出表达预测的抗原肽段的基因(mrp-1),构建重组原核表达载体pET32a-mrp-1,IPTG诱导表达,以渗透性休克法纯化重组蛋白;使用重组蛋白免疫血清和灭活猪链球菌2型SS2免疫血清Western blotting检测重组蛋白的免疫原性及其与SS2免疫血清的反应性;纯化的重组蛋白免疫雌性SPF昆明小鼠,SS2攻毒受试动物评估重组蛋白对小鼠的免疫保护力.Western blotting显示预测的950～1 210 aa肽段与PET32a重组表达的蛋白(MRP)具有良好的免疫原性和反应性;攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率为菌体免疫所提供保护率的66.7％.研究为利用该细胞表位簇作为高效免疫制剂奠定了基础.     

抗菌肽基因工程表达载体的研究进展

<正>近年来,由于传统抗生素的滥用,药物残留及耐药性问题日益严重,时刻威胁着人类的健康,寻找新的抗菌药物迫在眉睫。抗菌肽是一类分子量相对较小并由基因编码核糖体合成的生物活性肽[1]。Boman G.等人发现第1个天然抗菌肽天蚕素以来,便开启了抗菌肽研究的黄金时代。随着抗菌肽研究的不断深入,人们发现抗菌肽具有抗菌、抗病毒、抗癌、调节凋亡以及加快伤口愈合的功能。然而,天然抗菌肽的生产成本高、细胞选择性差,限制了天然多肽在临床上的应用[2],另外,