mRNA差异显示技术及其改进

分子生物学的首要任务之一就是比较不同细胞间或同一细胞不同时间与空间基因表达的差异。在多种基因检测技术中 ,mRNA差异显示技术作为研究细胞、组织在不同条件下 ,基因表达水平差异的重要手段 ,以不可替代的优势已被广泛用于生物学领域。该技术与传统的消减杂交等方法进行比较具有简便、快捷、灵敏、高效等优点 ,但也存在假阳性率高、易污染等缺点。为了克服以上缺点又不断涌现出一些改进技术。文章对该技术的原理、优势与不足及主要改进进行了综述     

新城疫病毒F48E9感染CEF细胞特异性表达基因的筛选鉴定

分别以NDV F48E9和La Sota株感染鸡胚成纤维细胞,于感染后8 h提取NDV感染CEF细胞总RNA,通过mRNA差异显示技术筛选病毒感染诱导表达的特异性基因.主要方法是先以锚定引物经反转录后,然后以9～10 bp随机引物为上游引物,以锚定引物Oligod(T)18为下游引物,进行PCR扩增,PCR产物采用8%的尿素变性PAGE胶电泳进行分离鉴定.对于特征性差异带进行第二次PCR扩增,克隆后测定其核苷酸序列.结果我们发现数个差异条带,选取差异带在500 bp以内的条带,经测序后显示经NDV F48E9感染后,有一条差异条带特异性表达的基因所编码的蛋白与Receptor(TNFRSF)-interacting serine-threonine kinase 2有47 %同源,是一个新基因,其蛋白功能不明确,有可能和细胞的凋亡有关.     

山羊B组轮状病毒KB－63株动物感染实验

以山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３株（本室分离鉴定）口服接种剥夺初乳的新生山羊羔、绵羊羔、犊牛以及仔猪。该毒株可在接种后１２～１７ｈ内引起山羊羔、绵羊羔，以及犊牛发生急性腹泻，并排出大量病毒，其核酸电泳图型及组抗原检测也与原接种病毒一致。当该毒株接种剥夺初乳仔猪时，不能引起仔猪腹泻也不排出病毒     

一株电泳型独特的猪B组轮状病毒的分离鉴定

１９８９年春，在新疆某猪场采集的仔猪腹泻粪样中，以ＰＡＧＥ法检出一株电泳型独特的非典型轮状病毒，其电泳型与Ｃｈａｓｅｙ等［１］报道的猪Ｅ组轮状病毒相似，该毒株样品口服接种剥夺初乳仔猪可在１２～１６ｈ后引起仔猪急性水样腹泻，并可在剥夺初乳仔猪体内稳定传代，但在用ＥＬＩＳＡ和ＣＩＥ法检测时发现该毒株不具有Ａ组轮状病毒组抗原，而具有Ｂ组轮状病毒组抗原．后用Ａ、Ｂ组轮状病毒全基因核酸探针斑点杂交检测，它与Ａ组探针无杂交信号，而与Ｂ组探针则有杂交信号。证明该毒株为一电泳型独特的仔猪Ｂ组轮状病毒．     

伊犁地区雏鸡群沙门氏菌病的分离及病菌药物敏感性的调查

选择发病雏鸡群作为调查对象,研究伊犁地区鸡群中沙门氏菌病的流行情况。实验共调查发病鸡群23个,分别分布在伊犁地区的3个县城和5个乡镇,分出沙门氏菌的鸡群为20个。对这些沙门氏菌株,选用圆纸片扩散实验法(Kirby-Baueer Disc Diffusion)作药敏实验,结果所实验的12种药物中,丁胺卡那、头孢噻肟、氧氟沙星和利福平等药表现出较好的抑菌杀菌效果,但是所有实验沙门氏菌都有耐药现象存在。     

野马马鼻肺炎病实验诊断

野马马鼻肺炎病实验诊断单文鲁杜建陈德胜白惠敏卢伟东（新疆农业大学畜牧分院，乌鲁木齐８３００５２）刘福元（乌鲁木齐畜牧兽医草原检疫总站）普氏野马为甲级濒危物种，它原产于中国新疆、甘肃和蒙古人民共和国的干旱荒漠、半荒漠平原地带。１８７６年由俄国人Ｐｒｚｅ...     

抗犬细小病毒高免血清的制备和应用

应用差速离心和密度梯度平衡离心技术从患 CPV 性肠炎的犬粪便和肠内容物中提纯的 CPV 抗原接种犬,制备了高效价的抗血清。用该血清共治疗78头病犬,治愈率达82%(64/78).实践表明,自制的高免血清对患 CPV性肠炎的病犬具有治疗和控制疾病发展的作用,特别是早期病例,仅用抗血清即可治愈,对中期病犬结合支持和对症疗法可大大提高治愈率,有很高的应用价值。     

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱株基因组B节段的克隆和序列分析

用蛋白酶K法分离提取了鸡传染性法氏囊病病毒强毒株Gx及其致弱株Gt的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板用长距离一步法扩增出全长基因B节段,将其克隆入PMD18-T载体,进行了测序,并用DNAStar软件进行序列分析.测序结果表明,克隆的Gx株B节段全长为2 827bp,与超强毒参考株UK661的同源性为88.2%,与强毒参考株Harbin-1株的同源性达96.3%;克隆的Gt株B节段全长为2827bp,与弱毒参考株P2的同源性达99.5%.而Gx株与Gt株B节段的核苷酸的同源性只有89.8%;vvIBDV-Gx、IBDV-Gt株B节段全长的获得将为进一步构建感染性分子克隆奠定必要的基础.     

非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究

用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白Ｐ７２ 基因的重组杆状病毒（Ｂａｃｐ７２）作载体,在ｓｆ９细胞中表达并得到重组Ｐ７２蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可得到分子量在 ７２ｋＤａ左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 Ｐ７２蛋白进行 ＥＬＩＳＡ检测,证明该蛋白具有生物学活性。用Ｐ７２作为间接法的包被抗原,对ＥＬＩＳＡ反应条件进行了优化。确定最佳包被液为ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、最佳封闭液为１％ＰＣＴ、最佳血清稀释液为４％ＰＥＧ６０００／ＰＢＳ、最佳冲洗液为０．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ（ｐＨ７．２）。本实验反应体系采用５０μｌ的微量法,可节约试剂及抗原。反应在２小时内即可完成,达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于－２０℃的冰箱中,至少可以保存５个月。阻断试验和交叉试验表明ＥＬＩＳＡ法有良好的特异性。间接ＥＬＩＳＡ比Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果,与我国实际情况相符。用Ｂａｃｐ７２表达的非洲猪瘟病毒Ｐ７２蛋白抗原作为间接ＥＬＩＳＡ的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。