大肠杆菌猪水肿毒素B亚单位基因的克隆与鉴定

根据已知大肠杆菌志贺氏菌样毒素Ⅱ型变异体Ｂ亚单位（ＳＬＴ－ＩＩｖＢ）基因序列,设计并合成３条２对引物,以大肠杆菌Ｏ１３８基因组为模板,通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）分别扩增出２０４ ｂｐ的基因序列及包含一段信号肽的２６１ ｂｐ基因序列。将这两段ＤＮＡ分别克隆进表达性载体质粒ＰＹＡ３３３４的ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ位点之间,经地高辛标记探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和酶切分析鉴定,并对两条扩增片段进行序列     

肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因快速克隆和鉴定

以提纯的肠炎沙门氏菌染色体ＤＮＡ为材料，在一对含有ＣＵＡＣＵＡＣＵＡＣＵＡ的特殊引物引导下，应用ＰＣＲ扩增出鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ，ｍ，约１．８ｋｂ左右大小，然后以ＵＤＧ法快速克隆到质粒ｐＡＭＰ１０中，转化第１宿主大肠杆菌ＴＧ１或大肠杆菌ＤＨ５α，在氨苄青霉素平板上筛选转化子，小量制备重组质粒ＤＮＡ，再转入第２宿主大肠杆菌ＬＣ－２ａ（ｈａｇ－，ｒｅｃＡ－），所有转化子均出现动力。其中的一个克隆ｐＡＭＰ·ＧＭ经动力和动力抑制试验、血清学试验、鞭毛电镜观察及部分序列测定，均证实ｐＡＭＰ·ＧＭ中载有肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ，ｍ。ｆｉｌＣｇ，ｍ克隆成功为寻求肠炎沙门氏菌防制新方法奠定了基础，研究中建立的快速克隆策略为广泛、深入地开展ｆｌｉＣ研究提供了便捷的新途径。     

肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因快速克隆和鉴定

以提纯的肠炎沙门氏菌染色体ＤＮＡ为材料，在一对含有ＣＵＡＣＵＡＣＵＡＣＵＡ的特殊引物引导下，应用ＰＣＲ扩增出鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ．ｍ，允１．８ｋｂ左右大小，然后以ＵＤＧ法快速克隆到质粒，ｐＡＭＰ１０中，转化第１宿主大肠杆菌ＴＧ１或大肠杆菌ＤＨ５ａ，在氨苄青霉素平板上筛选转化子，小量制备重组质粒ＤＮＡ，再转入第２宿主大肠杆菌ＬＣ－２ａ（ｈａｇ－，ｒｅｃＡ－），所有转化子均出现动力。其中的一个克隆ｐ     

表达新城疫病毒融合蛋白F基因的重组减毒沙门氏菌的构建和鉴定

新城疫是鸡的一种烈性传染病,其病原新城疫病毒（ＮＤＶ）是副粘病毒科副粘病毒属的代表种,为一种单股负链ＲＮＡ病毒。ＮＤＶ的血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ蛋白）和融合蛋白（Ｆ）在新城疫（ＮＤ）发病过程中起着重要作用,两者均是ＮＤＶ的保护性抗原,因此ＨＮ基因和Ｆ基因常被用作研制ＮＤ基因工程疫苗的目的基因。近年来减毒沙门氏菌作为外源抗原载体,已成为新型疫苗研制的重要途径之一。由于减毒沙门氏菌仍具有侵袭性,通过其粘附、侵袭、定居肠相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）,并经肠系膜淋巴结到达肝、脾,有效地刺激机体产生局部粘膜免…     

鸡白痢沙门氏菌耐药性的监测研究

采用WHO推荐的Kirby-Bauer法对我国部分地区1962－1999年间346株鸡白痢沙门氏菌进行了药物敏感性测定。结果表明，在近40年时间里，鸡白痢沙门氏菌对氨苄青霉素、壮观霉素、复方磺胺、磺胺异恶性唑、甲氧苄胺嘧啶、羧苄青霉素、四环素、链霉素、青霉素的耐药率显著增强（P＜0.01)。菌株的多重耐药率明显增加。60年代以二耐菌株为主（37.0%)，70年代以四耐、五耐菌株居多（60.5%)，80年代五耐、六耐、七耐菌株占大多数（80.2%)，90年代仅七耐以上菌株就达83.7%。不同年代菌株显示出不尽相同的耐药谱，且呈现出不断增宽的趋势。通过流行病学调查发现，60年代至90年代，鸡白痢沙门氏菌对青霉素、链霉素、磺胺类药物、四环素、卡那霉素、氯霉素、庆大霉素等药物的耐药性大多呈现出显著增强的变化趋势，这充分说明细菌耐药性的形成和发展与抗菌药物长期反复使用有着极为密切的关系。研究对于指导临诊合理用药及控制疾病流行具有重要的现实意义。