广东省部分猪场猪流感抗体监测与分析

从广东省9个地级市采集42个规模猪场种公猪、肉猪和母猪血清共1 371份,用酶联免疫吸附试验和微量血球凝集抑制试验检测H1、H3、H9亚型猪流感抗体。结果表明:所监测猪场大部分猪群存在H1、H3、H9亚型猪流感抗体,H1、H3和H9亚型流感抗体阳性率分别在3.5%～44.0%、1.6%～20.0%和4.5%～15.6%之间,总阳性率分别为27.9%、6.1%和9.5%;另外,H1、H3和H9亚型猪流感抗体均以珠三角地区感染最为普遍;H1和H3抗体具有明显的季节性特点,秋冬季节的阳性率明显高于春夏季节。     

黑颈鹤源大肠杆菌的快速鉴定及致病特性的初步研究

对黑颈鹤病原菌进行快速鉴定及毒力因子分析。采用16S rRNA序列分析法鉴定黑颈鹤病原菌,其毒力基因分别用大肠杆菌的irp2、papC、iucD、tsh、iss毒力基因的特异性引物进行PCR检测,并将扩增出来的irp2基因序列与Genbank~（TM）相应序列进行同源性分析。分离菌株鉴定为大肠埃希氏菌,鉴定结果与生化检测结果一致,分离菌携带irp2毒力基因,这从毒力试验得到证实,其序列与与Genbank~（TM）上发表的HPI irp2基因序列同源性高达98%以上。采用16S rRNA序列分析法可以对黑颈鹤大肠埃希氏菌感染进行快速鉴定,黑颈鹤源性大肠杆菌携带有irp2毒力基因。     

犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

根据犬瘟热病毒的核衣壳蛋白(N)基因保守序列,设计特异性引物,建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法敏感性比普通RT-PCR高出100倍,重复性良好,变异系数在1.01%以下,对犬的常见病原核酸提取物检测均为阴性,证明特异性良好。对32份临床样本进行检测,27份为阳性,高于普通RT-PCR方法。试验结果表明该方法可用于犬瘟热感染情况的检测。     

猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白ORF2基因为目的基因,设计合成特异性引物和探针。PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体,筛选得到标准阳性质粒。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了PCV2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异性强,对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)等猪常见病原的检测结果均为阴性;与普通PCR方法相比,其敏感性高出100倍,可达100拷贝/μL;对临床样品的检测证明,该方法可有效检测出淋巴结、肺脏等组织中的PCV2。