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1.
以超速离心浓缩结合蔗糖密度梯度离心法提纯的鸭瘟病毒(DPV)作为抗原免疫家兔制备兔抗DPV血清,用饱和硫酸铵沉淀结合DEAE-Sephedax-A-50离子交换柱层析提纯兔抗DPV IgG,建立了检测甲醛固定鸭体组织石蜡切片上DPV抗原的间接酶免疫组化法。该法能特异地检测出DPV感染鸭组织中的DPV而对鸭疫里默氏菌、鸭源多杀性巴氏杆菌(5∶A)、鸭源大肠杆菌(O1)感染致死的鸭组织以及正常鸭组织呈阴性反应,检测DPV感染死亡鸭的肝、十二指肠、脑、脾和胸腺的结果与PCR检测结果相同。其敏感性高于原位杂交。对DPV CH强毒株人工感染致死鸭的检测结果表明,该法可特异检测到肝、肺、肾、脑、十二指肠、空肠、回肠、直肠、法氏囊、脾脏、腺胃以及食管中的DPV。DPV主要分布于这些器官的上皮细胞和巨噬细胞。对1992-2004年经10%福尔马林保存的鸭瘟临床病例的肝脏检测结果均为阳性。该法可用于DPV感染鸭的诊断和定位检测,也可用于对甲醛固定组织进行回顾性诊断检测。  相似文献
2.
对我国动物微生态制剂产业发展的战略思考   总被引:3,自引:3,他引:4  
欧盟监管委员会决定,自2006年1月起在动物养殖业中禁用抗生素生长促进剂,欧盟的抗生素禁令不仅对欧盟内部国家适用,而且欧盟所有进口饲料、饲料添加剂和动物产品出口到欧盟国家的企业都必须遵守抗生素禁令.日本是欧盟抗生素禁令的追随者,日本对从中国进口的动物产品的抗生素检测和相关规定非常严格,迫使我国动物产品出口企业逐步将饲料中的抗生素剔除.随着人民生活水平的提高,我国对无抗生素残留食品的需求亦日益高涨.  相似文献
3.
用鸭瘟病毒(DPV)Cha株弱毒苗皮下注射免疫20日龄樱桃谷鸭,应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR(FQ-PCR)对免疫后10、30、609、0 min及12、24 h和6、9、12、21、366、0 d鸭的心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、法氏囊、哈德氏腺、回盲处、血液、气管、气管分泌液、食管及其分泌液、十二指肠、空肠、回肠、肓肠、直肠及各肠段分泌液中DPV-DNA的拷贝数(以对数值表示)进行了检测。结果显示,免疫后10 min即可在胸腺和血液中检测到DPV-DNA;60 min肾脏中DPV-DNA拷贝数最高(9.349);脾(9.932)、脑(9.791)、胸腺(9.736)、法氏囊(9.598)及哈德氏腺(8.135)中DPV-DNA拷贝数于90 min分别达到最高;12 h后所有受检样品中都能检测到DPV-DNA,其中心脏中DPV-DNA拷贝数最高(9.818);肠道中DPV-DNA拷贝数在免疫后6~12 d明显高于其他组织,其中盲肠是DPV-DNA拷贝数(10.591)最高的受检样品,直肠分泌液中DPV-DNA最早于90 min检测到。研究表明,免疫鸭于免疫早期在包括主要免疫器官在内的各实质...  相似文献
4.
鸭瘟病毒强毒株在急性人工感染成年鸭病例体内分布规律   总被引:3,自引:3,他引:7  
5 6只 3月龄四川麻鸭经皮下接种鸭瘟病毒 (DPV)强毒 SC1株 ,成功建立了 DPV感染的急性病理模型 ,并应用PCR方法检测了不同时间 DPV在感染鸭体各组织器官的分布情况。结果表明 ,接种 2 h后 ,即能够从脑、肝、脾、法氏囊、胸腺中检出 DPV DNA;12 h,可从心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食管、腺胃、血液、舌、口腔分泌物、皮肤、骨髓和粪便等检测到 DPV的 DNA。检出时间最早和检出率最高的组织器官为肝脏和脑组织。本试验为阐明 DPV的致病机理和应用 PCR方法检测感染鸭体组织中的 DPV提供了重要的实验数据。  相似文献
5.
以血清1型鸭疫里默氏杆菌(RA)CH-1株为材料提取基因组DNA,采用限制性内切酶Sau3A进行部分酶切消化,纯化回收1.0~6.5 kb片段,用T4DNA连接酶将回收片段与经BamH酶切并去磷酸化的ZAP Express载体进行连接,用噬菌体包装蛋白包装。经测定包装滴度为5.23×106pfu/mL,蓝白斑筛选重组率为96.8%,表明已成功构建血清1型RA CH-1株部分基因组文库。在此基础上以RA抗血清为抗体探针进行免疫筛选,获得3个阳性克隆,经多次重复筛选后再体内删除,得到含有插入片段的质粒并测序。生物信息学分析结果显示,该序列(GenBank登录号:DQ151838)含有1个编码369个氨基酸的完整开放阅读框架,是尚未见报道的RA基因序列,并且存在多个预测的抗原表位。  相似文献
6.
致羔羊脑炎粪肠球菌分离鉴定及毒力因子基因的PCR检测   总被引:2,自引:2,他引:0  
从新疆部分地区羊场近年来发生的以脑炎为主要临床特征的病死羔羊体内分离出2株细菌,经鉴定为粪肠球菌。经链球菌A-G乳胶分型诊断液检测后确定为D群链球菌。该菌对小鼠和羔羊有较强的致病性,人工感染可引起小鼠的死亡,感染羔羊能够复制出与自然感染相同的临床症状和病理变化,并从感染发病和死亡羊的脑、心血、肝脏中再分离到相同细菌,分离菌对万古霉素、氟苯尼考、头孢噻肟钠、诺氟沙星和恩诺沙星敏感,根据GenBank中粪肠球菌主要毒力因子的基因序列设计引物进行PCR检测,结果显示,1株细菌明胶酶(GelE)、聚合物质(Asa1)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(Ace)、新的表面蛋白1(EF3314)等毒力因子基因阳性;另1株细菌溶血素激活因子(CylA)、表面蛋白(esp)、聚合物质(Asa1)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(Ace)、2种新的表面蛋白1和2(EF0591和EF3314)等毒力因子基因为阳性。  相似文献
7.
用提纯的鸭肝炎病毒(DHV)免疫家兔制备高免血清,常规方法提取IgG,与1%葡萄球菌A蛋白(SPA)阳性菌悬液混合,以PH7.20.2mol/LPBS作缓冲液,制成鸭病毒性肝炎(DVH)SPA协同凝集试验(SPA-CoA)诊断试剂,同时制备阴性对照试剂。用SPA-CoA检测人工感染致死的雏鸭肝脏、含DHV强毒的鸭胚液、适应鸡胚的疫苗毒鸡胚尿囊毒的检出率均为100%。用SPA-CoA检测强毒时,样品  相似文献
8.
高钼对雏鸡肾脏的病理损伤和抗氧化功能的影响   总被引:1,自引:1,他引:4  
300只1日龄Avian肉鸡健雏随机分为4组,分别喂以对照日粮(Mo 13 mg·kg-1)和高钼日粮(Mo 500mg·kg-1,高钼Ⅰ组;Mo 1 000 mg·kg-1,高钼Ⅱ组;Mo 1 500 mg·kg-1,高钼Ⅲ组)42 d,研究高钼致雏鸡肾脏的病理损伤.与对照组比较,高钼组雏鸡肾脏肾小管上皮细胞肿大、颗粒变性和空泡变性;超微结构观察,肾小管上皮细胞内质网扩张、线粒体空泡化或体积缩小,基质电子密度增加,核膜扩张,微绒毛出现髓鞘样结构;高钼Ⅱ、Ⅲ组雏鸡肾脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著下降(P<0.01),丙二醛(MDA)含量极显著升高(P<0.01);血清中上述相应酶活性和丙二醛含量变化与肾脏的一致,同时,高钼Ⅱ、Ⅲ组血清肌酐和尿酸含量显著高于对照组(P<0.05或P<0.01).结果表明,日粮钼含量1 000 mg·kg-1及以上可引起肾脏的病理损伤和抗氧化酶活性降低,导致肾脏功能受损.  相似文献
9.
为探索鸭α干扰素(IFN-α)真核表达质粒(pcDNA-SDIFN-α)对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭的细胞免疫调节作用,本研究将pcDNA-SDIFN-α以1、3和6μg/只3个剂量用基因枪轰击法分别免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA3.1( )为对照,所有鸭15 d后接种鸭瘟(DP)弱毒疫苗。接种后第3、7、14、21、28、35、49、63、84天采血用淋巴细胞增殖试验(MTT法)测定鸭外周血中T淋巴细胞转化效果;第7、14、21、28、35、49天采血用流式细胞仪(FACS)测定CD3 T淋巴细胞数量的动态变化。结果发现:①T淋巴细胞对ConA的反应能力(OD值),不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭外周血T淋巴细胞转化功能于第3-84天均高于PBS和空载体pcDNA对照组,其中第3-84天1μg/只组极显著(P≤0.01)高于PBS和pcDNA对照组,3μg/只组极显著(P≤0.01)或显著(P≤0.05)高于PBS和pcDNA对照组,6μg/只组于第7-49天极显著(P≤0.01)或显著(P≤0.05)高于PBS和pcDNA对照组;1μg/只组第3-35天显著(P≤0.05)高于3、6μg/只组;3μg/只组于第14-35天高于6μg/只组,但差异不显著(P≥0.05);pcDNA对照组略高于PBS对照组,但差异不显著(P≥0.05);②CD3 T淋巴细胞数量变化,不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭于第7-49天均高于PBS和pcDNA对照组,其中1μg/只组于第14-49天极显著(P≤0.01)高于PBS和pcDNA对照组,3μg/只组于第21-49天极显著(P≤0.01)高于PBS对照组和显著(P≤0.05)高于pcDNA对照组,6μg/只组于第7-49天显著(P≤0.05)或极显著(P≤0.01)高于PBS和pcDNA对照组;1、3和6μg/只组之间差异不显著(P≥0.05);pcDNA组于第14-49天高于PBS组,但差异不显著(P≥0.05)。研究表明,pcDNA-SDIFN-α提前15 d免疫能显著增强DP弱毒疫苗诱导的鸭细胞免疫力,以基因枪免疫1μg/只的效果最佳,它是一种良好的增强DP弱毒疫苗细胞免疫的分子佐剂。  相似文献
10.
鸭病毒性肝炎的病原分离和鉴定   总被引:1,自引:1,他引:0  
从间接免疫荧光检测呈DVH阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒,电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜,直径30~40nm,对氯仿、pH3.0、50℃,60min的处理不敏感,分离毒连续传代3次,全部鸭胚在24~60h死亡,胚体呈弥散性充血、出血,其致死鸭胚的能力能够被Ⅰ型DHV高免血清中和。分离毒人工感染1日龄雏鸭后出现与自然病例相同的临床症状和病理变化,并能重新分离到相同病毒。间接免疫组化检测自然病例和人工感染雏鸭的肝、脾、肾等均呈现DVH阳性。结果表明分离到的3株病毒均为Ⅰ型DHV,为有效预防DVH提供了有用的实验数据。  相似文献
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