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1.
禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因序列分析   总被引:20,自引:4,他引:16  
采用RT_PCR技术,以A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)RNA为模板,扩增了1.73kb 的HA 全基因cDNA。将HAcDNA克隆后进行了序列测定,测序结果表明所扩增的1728 个核苷酸片段包含了完整的HA基因的开放阅读框架和上下游引物序列、蛋白质合成的起始密码子和终止密码子。核苷酸序列比较分析结果表明:A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1) 与A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)有11 个核苷酸差异,同源率99.4% ;与A/HongKong/156/97(H5N1) 有25 个核苷酸差异,同源率98.6 % ;与A/Chicken/HongKong/258/97 (H5N1) 有30 个核苷酸差异,同源率98.3% ;它们的氨基酸序列同源率依次分别为99 .2 % 、98.6% 和98.1% 。受体结合位点的氨基酸序列完全一致;HA裂解位点氨基酸序列也完全一致,各有5 个碱性氨基酸插入。这说明上述4 个流感病毒分离株可能来自同一个祖先,具有相同的毒力和相似的生物学特性。  相似文献
2.
鸭源禽流感病毒的分离和鉴定   总被引:19,自引:1,他引:18  
从南京鸡鸭加工厂、孝陵卫鸭场及迈皋桥鸭场共采制113个泄殖腔拭子,用鸡胚尿囊腔接种传代法分离到4株禽流感病毒(AIV),每个样品均有NDV混感。纯化后的分离株利用电镜负染技术观察到典型的AIV粒子。琼扩试验证明4个分离株均为A型流感病毒。经血凝素亚型分析,4株均属于H9亚型。致病性试验结果表明,4株鸭源禽流感病毒对鸡均表现为较低的致病力。本研究提示环境(特别是水体)保毒是AIV得以长期存在和传播的重要因素和媒介。  相似文献
3.
禽流感病毒人工感染鸡抗体的监测及血凝素分型血清的制备   总被引:13,自引:1,他引:12  
从英国中心兽医实验室引进禽流感病毒14种凝素亚型的标准毒株,经9-11日龄的SPF鸡胚增殖,传代后收取感染鸡胚的羊水及尿囊液,经1000xg离心15分种后,收取上清作为免疫原。取8保12周龄SPF鸡分成A,B两组,进行人工感染鸡的抗体消长规律试验。  相似文献
4.
采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒A/Guangdong/3/96(H5N1)[GD3/96]神经氨酸酶(NA)基因,并将其克隆到pUC18质粒中进行测序。核苷酸序列测定结果为:NA基因全长为1410bp,共编码469个氨基酸,从pUCNA中切下NA基因片段,将其亚克隆到质粒pSY538的EcoR I位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的Sma I位点,然后切下同位含有NA及LacZ基因的片段,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的Not I位点,经限制性内切酶分析,PCR鉴定等,证明含有禽流感病毒NA基因的重组禽痘病毒转移载体已构建成功,从而为进一步筛选表达NA蛋白的重组禽痘病毒及探讨该蛋白的免疫原性鉴定了实验基础。  相似文献
5.
禽流感灭活疫苗的标准化研究   总被引:9,自引:0,他引:9  
本文对我国禽流感灭活疫苗研制的现状、国际上标准化禽流感灭活疫苗的研究、禽流感疫苗标准化的必要性、研究和生产标准化禽流感疫苗硬件设施的需求、标准化禽流感疫苗用种毒和免疫佐剂的选择、标准化流感灭活疫苗中血凝素含量的测定、以及标准化禽流感疫苗生产中的关键技术问题等分别进行了论述,同时阐明了作者观点。  相似文献
6.
间接ELISA,HI及AGP检测鸡血清中抗AIV抗体的敏感性比较   总被引:7,自引:1,他引:6  
用鸭源A型流感病毒H9N?滴鼻、点眼辅以腹腔注射,人工感染3周龄SPF来航鸡,分别用AGP、HI试验及间接ELISA定期测定其抗AIV血清效价。结果,HI试验及间接ELISA于攻毒后第7~79天显示阳性;AGP试验从第13~79天呈阳性。根据首次检出血清中抗AIV抗体的时间,间接ELISA比AGP、HI更灵敏、快速。  相似文献
7.
中国禽流感流行株的分离鉴定   总被引:7,自引:2,他引:5  
分别从广东、四川、新疆等地禽流感(AI)血检阳性、发病率高、产蛋率下降的鸡群中采集186份病料,先后分离到6株A型流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代,可凝集鸡红细胞,血凝价达160~1280倍。不被新城疫、减蛋综合症、败血支原体阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成琼脂扩散(AGP)抗原与禽流感标准阳性血清可出现白色沉淀线。分别将分离毒株与AI标准分型血清H1~H14、N1~N9进行HI、NI试验,结果川和川农株均为H4N6,西昌1和2株及Sh株均为H9N2,新疆石河子(石)株为H14N5。分离株分别做脑内接种致病指数(ICPI)、静脉接种致病指数(IVPI)测定,结果所有分离株ICPI介于024~148之间,IVPI介于015~056之间.通过电镜观察,可见直径为80~120nm球状或杆状典型的禽流感病毒.经联机检索,从新疆石河子AI阳性鸡场产蛋下降的鸡群中分离出的H14N5株为国内外首次从鸡中分离出的H14亚型禽流感病毒。将某单位送检的禽流感鹅体分离株(G1株和G2株)做了血清型和毒力测定,试验结果认定,G1和G2株均为A型禽流感病毒H5N1亚型,G1、G2株对鸡均达到高致病力毒株标准。  相似文献
8.
表达禽流感HA和NP双基因重组禽痘病毒的免疫保护性   总被引:6,自引:1,他引:5  
将分别来自禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA基因和A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NP基因重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这两种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV—HA—NP)。将rFPV—HA—NP经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,并设亲本禽痘病毒免疫和非免疫对照组。免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒rFPV—HA—NP免疫鸡群后能够诱导产生高水平的特异性抗体,可完全抵抗H5N1毒株的致死性攻击,并可有效阻止H7N1病毒攻击后病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明NP在与HA共同表达时,在诱导交叉保护性方面有一定的免疫增强功能。  相似文献
9.
H9N2禽流感病毒中国分离株血凝素基因序列的初步分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
10株中国H9N2禽流感病毒分离株的血凝素基因分析表明,这些分离株间的亲缘关系较近,推测它们可能来源于同一种系,H9亚型分离株的HA1亚单位系统发育分析表明中国AIV分离株与97香港禽类市场上分离到的毒株不同,中国分离株中在HA切割位点上均未见到典型的高致病力毒株H5、H7所具有的一系列碱性氨基酸,其排列均为-PARSSGLF-,系统发育分析表明该10株属欧亚种系。  相似文献
10.
禽流感RT-PCR诊断法的建立   总被引:5,自引:0,他引:5  
根据禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Breslin/1902(H7N7)株的血凝素(HA)基因参考序列设计合成一对H7HA特异引物,并应用SDS-蛋白酶K法提取病毒RNA,建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AIVRNA的方法。应用此法对鸡胚培养的AIV尿囊液、SPF感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDS-76V)等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,AIV尿囊液RT-PCR全部阳性,SPF感染鸡粪便87份,RT-PCR检出69份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出11份,电镜检测了23份样品,仅检出2份阳性。非特异性对照样品经RT-PCR检测全部阴性。将AIV感染鸡胚尿囊液作10倍系列连续稀释,可检出稀释度为10-2的病毒尿囊液。RT-PCR最早检出时间为感染后第3天,而琼扩和电镜均是7天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间(只需8小时左右),可从分子水平上对AIV进行早期快速诊断和流行病学调查  相似文献
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