雏鸡混合感染IBDV与CAV的研究

实验分为4组：空白对照组、CAV感染组、IBBDV感染组、IBDV－CAV混合感染组。选择IBDV发病严重期（6日龄）与CAV发病严重期（13日龄）测定并计算各组鸡的法氏囊、胸腺和体重的比值；分离外周血、法氏囊和胸腺中的淋巴细胞，加入适量的刀豆蛋白（ConA）和商陆凝集素（PAM）作为有丝分裂刺激原，利用MTT法检测实验鸡免疫细胞的功能变化；统计死亡率，绘制死亡曲线。研究发现，IVDB与CAV的混合感染较单独感染严重降低了感染鸡免疫活性细胞的增殖功能，并同时增强了IBDV或CAV的致病力，出现两次死亡高峰，病死率达100％。  

CIA抗体的间接ELISA检测方法

本试验建立了包被已知抗原，检测未知抗体的间接ＣＩＡ－ＥＬＩＳＡ方法，包被抗原为ＭＤＣＣＭＳＢ１，Ｃｕｘ－株上清，与血清样品作用。加酶联兔抗鸡ＩｇＧ后，与底物５－氨基水杨酸显色，并制定了合理的判定标准，此方法特异性好，操作简便，适于大批鸡抗体水平检查，并为免疫监测可靠技术手段。  

鸡传染性贫血重组抗原间接ELISA诊断方法的建立

本研究应用重组抗原,成功建立了检测鸡传染性贫血病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法.确定了抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清最适稀释度为1:100,其作用时间为60min,酶标抗体最适作用时间为60min,S/P≥0.24为阳性,≤0.19为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准.该抗原不与鸡其他疾病的10种阳性血清反应,具有良好的特异性;批内重复试验,变异系数小于10%,批间重复试验,变异系数小于15%,具有良很好的重复性;该方法可检出人工接毒后20d的血清抗体,直到试验结束110 d时,仍能检出鸡血清阳性率为81%与全病毒包被抗原ELISA方法的检测结果符合率达92%以上,与进口诊断试剂盒的符合率为97%.本研究为现地免疫鸡群抗体检测和进行CIA流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.  

传染性法氏囊病超强毒Gx株的致弱研究

本研究成功将鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDVGx株通过SPF鸡胚的快速培育及鸡胚成纤维细胞传代致弱，揭示了vvIBDV从超强毒力向弱毒力转化过程中，其主要结构蛋白VP2基因核苷酸及推导的氨基酸序列的变化规律。对不同代次细胞毒进行了序列分析。发现细胞毒在第7代以前，VP2基因序列没有改变。与欧洲标准超强毒氨基酸同源性达100%；细胞毒第8代，有个别核苷酸发生了改变。但没有影响氨基酸序列；细胞毒第9代是变化复杂的过渡代；10代毒VP2基因与欧洲标准弱毒Cu-1氨基酸序列同源性达97%；以后的细胞适应毒至20代。其VP2基因序列不再改变。致病性实验表明原代毒对4周龄SPF鸡致死率为64%。细胞毒第5代的致死率为60%，而20代毒对鸡无致病性。在鸡体内连续传代6代不返强。  

中国高致病性禽流感免疫预防风险评估

疫苗接种是当前我国预防和控制HPAI疫情的有效手段之一.由于影响HPAI免疫预防效果的因素众多,会给免疫预防带来风险.对这些风险因子进行识别,并系统分析其所引起的风险程度的高低,进而采取针对性的风险管理措施,能有效提高免疫预防的效果.本研究首次运用层次分析法（Analytic Hierarchy Process, AHP）构建了HPAI免疫预防风险评估模型,通过确定风险因子权重,依权重大小对风险因子进行排序,确定风险等级.分析结果表明：管理不良、接种操作不规范、实验室监测等是我国免疫预防的高风险因素.通过对免疫预防风险进行综合分析,为HPAI免疫预防管理和决策提供了科学依据.  

J-亚群禽白血病JL-2株的分离鉴定

近年来，J-亚群禽自血病的暴发流行在国内时有报道，在本研究中，自吉林某患病鸡群分离出一株病毒，采用特异性引物，经RT-PCR扩增出长度为545bp的J-亚群禽自血病病毒特异性核苷酸片段；将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖，获取其前病毒DNA，依据原型毒株RPRS-103 cDNA序列设计并合成一对引物，经PCR扩增得到包括gp85、gp37、E-element基因在内的近1．8kb的DNA片段，将其连到pMD18-T载体上，转化大肠杆菌JM109，培养后提取质粒分别用Hind Ⅲ，BamHI进行单酶切和双酶切鉴定，得到了阳性重组质粒pMD18-T-JL2／env，核苷酸序列测定结果表明，该片段为J-亚群禽白血病病毒囊膜基因，其中亚型特异性片段gp85和标准对照毒株HPRS-103的同源率为94％，所编码氨基酸的同源率为87％。  

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱株基因组B节段的克隆和序列分析

用蛋白酶K法分离提取了鸡传染性法氏囊病病毒强毒株Gx及其致弱株Gt的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板用长距离一步法扩增出全长基因B节段,将其克隆入PMD18-T载体,进行了测序,并用DNAStar软件进行序列分析.测序结果表明,克隆的Gx株B节段全长为2 827bp,与超强毒参考株UK661的同源性为88.2%,与强毒参考株Harbin-1株的同源性达96.3%;克隆的Gt株B节段全长为2827bp,与弱毒参考株P2的同源性达99.5%.而Gx株与Gt株B节段的核苷酸的同源性只有89.8%;vvIBDV-Gx、IBDV-Gt株B节段全长的获得将为进一步构建感染性分子克隆奠定必要的基础.  

传染性法氏囊病超强毒Gx株VP5基因在病毒致弱过程中的变异研究

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒(vvIBDV)Gx株进行培育,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱,对其非结构蛋白VP5基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析,从而揭示vvIBDV Gx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律.对不同代次细胞毒序列分析的结果表明,细胞毒在第8代以前,VP5基因序列没有改变,与欧洲标准超强毒氨基酸同源性达98%以上;细胞毒第9代核苷酸和氨基酸序列发生了改变;10代毒VP5基因与欧洲标准弱毒Cu-1氨基酸序列同源性达99%;细胞适应毒传至20代,其VP5基因序列不再改变.从而说明,vvIBDV Gx株VP5基因在致弱过程中存在变化规律.  

黑龙江省鸡传染性贫血病的流行病学调查

鸡传染性贫血病(Chicken infectious anemia,CIA)于1979年由日本学者Yuasa等首次报道,此后,相继在西德、瑞典、英国、丹麦、波兰、美国、澳大利亚、荷兰及巴西等国陆续证实了本病的存在.我国于1992年首次分离到鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV).  

鸡传染性法氏囊病超强毒致弱株的生物学特性研究

将vvIBDV国内分离株-G株经SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞连续传代致弱，得到适应细胞的致弱株。暂命名为IBDVGt。其毒价为2.0×108PFU／ml以上，具有较好的抗原性，对鸡无致病性。返祖试验及病理组织学试验证明，致弱株可在鸡体内连续传至4代，未有返强现象。