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1.
鸡痘病毒PCR检测方法的建立   总被引:6,自引:2,他引:4  
根据已发表的鸡痘病毒 (fowlpox virus,FPV) 4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了 2对引物 ,通过对影响PCR扩增因素的优化 ,2对引物在同一反应条件下 ,以抽提 FPV DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的 5 4 9、136 1bp的片段。特异性检测表明 ,2对引物对 FPV10 2株、FPV2 82 E4 (北京 )、FPV2 82 E4 (吉林 )、v FV2 82重组鸡痘疫苗毒及 FPV临床分离株均能扩增出相应特异性片段 ,而用鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、羊痘病毒、鸡胚成纤维细胞 (CEF)制备的模板分别进行 PCR扩增却成阴性。敏感性检测表明 ,2对引物 (p1 ,2 、g1 ,2 )分别能检测到 10 - 2 、10 - 3fmol的 FPV DNA和 10 0 .5、10 - 0 .5TCID50 的病毒。以上结果表明 ,本试验所建立的 FPV PCR检测法具有较高的特异性和敏感性 ,模板制作简单 ,完全可用于 FPV的检测  相似文献
2.
将本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1—2A基因以及蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及共表达P1—2A和猪白介索18基因的重组DNA疫苗(pVIRIL18P1),分别以单独及混合的共3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明这2种基因工程疫苗均能诱导牛产生特异性的体液及细胞免疫应答。其中重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫组以及联合免疫组(vUTAL3CP1/pVIRIL18P1,pVIRIL18P1/vUTAL3CP1)诱导的中和抗体滴度分别达到1:64、1:64和1:54,已接近于常规灭活疫苗水平(1:90),而特异性的T淋巴细胞增殖反应则比后者高得多(P〈0.01)。该研究结果为进一步进行免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。  相似文献
3.
通过两侧翅内侧皮肤无血管处刺种和滴鼻、点眼等途径给10日龄商品蛋公鸡接种鸡痘病毒(FPV)弱毒疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸡体内的分布与消长规律并对其毒性进行了研究。刺种组:接种后6h在刺种部位皮肤即可检测到病毒DNA;接种后1d,皮肤、肺、脑PCR检测阳性;7d,在皮肤、肺、脑,心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;10、15d,肝为阳性;21d,脾、法氏囊PCR检测为阴性,肝为疑似;28d,除刺种部位皮肤外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA,但刺种部位皮肤一直到接种后35d仍可检测到病毒DNA。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。滴鼻点眼组:基本规律与刺种组相同。接种后3h,在肺部即可检测到病毒DNA;6h,在肺和脑部PCR检测成阳性,法氏囊为疑似;1d,在肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;21d,肺、肾、法氏囊、脑均为阳性。其中脑一直持续到接种后28d。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。毒性试验表明,FPV弱毒疫苗株虽使用安全但通过翅内侧皮肤无血管处大量刺种存在导致全身皮肤感染出痘的危险。  相似文献
4.
通过两侧翅内侧皮肤无血管处刺种和滴鼻、点眼等途径给10日龄商品蛋公鸡接种鸡痘病毒(FPV)弱毒疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸡体内的分布与消长规律并对其毒性进行了研究。刺种组:接种后6h在刺种部位皮肤即可检测到病毒DNA;接种后1d,皮肤、肺、脑PCR检测阳性;7d,在皮肤、肺、脑,心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;10、15d,肝为阳性;21d,脾、法氏囊PCR检测为阴性,肝为疑似;28d,除刺种部位皮肤外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA,但刺种部位皮肤一直到接种后35d仍可检测到病毒DNA。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。滴鼻点眼组:基本规律与刺种组相同。接种后3h,在肺部即可检测到病毒DNA;6h,在肺和脑部PCR检测成阳性,法氏囊为疑似;1d,在肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;21d,肺、肾、法氏囊、脑均为阳性。其中脑一直持续到接种后28d。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。毒性试验表明,FPV弱毒疫苗株虽使用安全但通过翅内侧皮肤无血管处大量刺种存在导致全身皮肤感染出痘的危险。  相似文献
5.
重组鸡痘病毒vFV282疫苗株理化特性测定   总被引:1,自引:0,他引:1  
将重组鸡痘病毒疫苗株 vFV282 经酸、碱、热、氯仿、乙醚以及胰蛋白酶处理,接种到CEF上,观察处理前后重组鸡痘病毒疫苗株 vFV282 毒力活性的变化,分析这些理化因子对重组鸡痘病毒疫苗株 vFV282 的影响。结果在pH 3.0~pH 9.0 范围内,pH变化不会造成该重组鸡痘病毒疫苗株 vFV282毒力活性的显著变化。该重组鸡痘病毒疫苗株vFV282经50 ℃ 60 min、55 ℃ 30 min或60 ℃ 15 min即可被灭活,对氯仿敏感,经胰蛋白酶37 ℃作用 1 h,TCID50降低 2.55 log TCID50/0.1 mL,对乙醚不敏感,经乙醚作用24 h, TCID50下降1.0 log TCID50/0.1 mL。  相似文献
6.
将重组鸡痘病毒vFV282疫苗用生理盐水作10^-1,10^-2,10^-3,10^-4系列稀释,分别免疫7天龄鸡,于免疫后21d,分别用NDV、IBDV和FPV攻毒,观察其保护率,结果除NDV攻毒在10^-4组保护率为40%(4/10),其余各组均为100%(10/10)保护。表明该疫苗的最小免疫剂量≤10^-3TCID50/0.02mL。  相似文献
7.
用1羽份重组鸡痘病毒vFV282活疫苗对7日龄商品鸡分别进行刺种免疫和肌注免疫,28d时刺种进行二次免疫,通过不同时间阶段脾脏淋巴细胞转化指标分析表明,Con A刺激脾淋巴细胞增殖反应的净增值(OD570nm)于免疫后7d时明显升高0.092,28d时达到最高峰0.155,42d时下降至0.032,首次免疫后刺种组明显优于肌注组,二次免疫高于一次免疫组。  相似文献
8.
配合饲料及动物性饲料如鱼粉、骨粉等是动物摄取蛋白质、钙、磷的主要来源,也适合沙门氏菌及其他致病菌的生存。国内文献已多次报道因沙门氏菌污染饲料而导致畜禽大量死亡的事例,给畜牧业造成巨大的经济损失。沙门氏菌是最常见的人畜共患病原菌之一,能引起人和动物肠热症、胃肠炎、败血症等。因此必须在饲料原料、饲料加工生产中严格控制沙门氏菌,准确检测出饲料中的沙门氏菌是质量控制的一个重要环节。沙门氏菌共有2500以上的血清型,目前对该菌的检测主要有常规检测、免疫酶试验、免疫扩散法、乳胶凝集试验、荧光抗体法、酶联免疫吸附试验及PCR等方法。  相似文献
9.
猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的一种高度传染性疾病,临床可分为急性型、亚急性型、慢性型、非典型性和不明显型猪瘟。由于大剂量和高密度猪瘟弱毒疫苗的免疫,当前我省范围内急性猪瘟已不多见,而以慢性型和非典型性猪瘟为主。  相似文献
10.
将海兰褐蛋雏鸡随机分为对照组、肌肉注射组、刺种Ⅰ组和刺种Ⅱ组,用共表达NDV F和IBDV VP0基因重组鸡痘病毒进行免疫,对照组刺种生理盐水,在免疫后的第7,14,21,28,35,42,49 d和56 d采血,分离血清,用固定病毒稀释血清法测血清中抗FPV,NDV,IBDV的中和抗体效价.经分析,抗FPV中和抗体效价及抗NDV中和抗体效价免疫后14 d达到高峰,28 d后下降幅度不明显,42 d时仍保持一定水平;抗IBDV中和抗体效价免疫后21 d达到高峰, 28 d后下降幅度不明显,42 d时仍保持一定水平.  相似文献
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