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1.
梅山猪β干扰素基因的克隆、原核表达及生物活性   总被引:4,自引:0,他引:4  
利用PCR技术从中国梅山猪白细胞总DNA中扩增出猪β干扰素基因(MS-IFNβ)。将PCR产物克隆至pMD18-T载体,利用双脱氧末端终止法测定了全基因的核苷酸序列。序列分析表明,β干扰素基因全长561bp,编码186个氨基酸,与GenBank中S41178的序列同源性达99%,在128、177位核苷酸处发生了点变异,由G变为A,T变为C,但仅导致43位氨基酸由G变为E。在此基础上,合成了1对引物,通过PCR方法将编码成熟蛋白基因亚克隆到pGEX-KG表达载体,转化宿主菌BL2,(DE1),经IPTG诱导后,得到高效表达,所表达蛋白质的大小约为47000,占总蛋白的23%。表达产物主要为不溶性的包涵体,包涵体经提纯后,能够抑制口蹄疲病毒(FMDV)增殖。  相似文献
2.
口蹄疫诊断技术研究进展   总被引:4,自引:0,他引:4  
口蹄疫的有效控制关键在于早期检测 ,然而有很多疾病症状与口蹄疫相似 ,仅靠临床症状难以确诊 ,因此必须进行实验室诊断。实验室诊断包括病毒学诊断和血清学诊断。病毒学诊断方法有病毒分离、补体结合试验、酶联免疫吸附试验 ( EL ISA)、RT-PCR以及乳胶凝集试验 ( L AT)。 RT-PCR有待进一步完善 ,而用于野外检测的现场诊断方法已取得可喜进展。血清学诊断包括中和试验和 EL ISA,中和试验已经被 EL ISA方法取代 ,并且通过检测非结构蛋白的抗体可以区分感染动物和免疫动物。更加快速、敏感、可靠以及用于检测潜伏感染的诊断技术将是今后研究的热点。  相似文献
3.
仔猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验   总被引:1,自引:0,他引:1  
从20多个猪场中采集仔猪腹泻粪便,进行大肠杆菌的分离培养,经接种小白鼠进行致病性鉴定后,共获得276株致病性大肠杆菌;并从水肿病猪的水肿液中分离鉴定出1株猪水肿病致大肠杆菌。对其中112株进行了药敏试验;先锋霉素V的敏感菌株为96.3%,环丙沙星为56.3%,诺氟沙星为50.5%,卡那霉素和庆大霉素均为45.9%。蓖株的耐药率,四环素为96.8%,链霉素为71.8%,复方新诺明为67.5%,随机抽取10株进行了5种微量糖发酵试验;结果均符合大肠杆菌生化特性。此外对广西某猪场分离出的大肠杆菌进行了黏附素抗原鉴定为阴性。  相似文献
4.
口蹄疫病毒主要免疫原性基因VP1的B细胞和T细胞抗原表位位于其C末端,参照Taiwanse97(AJ294928)设计了1对特异性引物,扩增出VPl基因C末端。序列分析表明:其C末端长285bp,编码74个氨基酸,与O/HKN/12/91、O/PEN/TAW/99核苷酸和氨基酸同源性分别为95%、93%和96%、93%;利用同尾酶Xho I、Sall将VP1基因C末端串连起来;再将单拷贝和双拷贝C末端基因插入到原核表达载体pGEX-KG后,转化BL21(DE3),在IPTG诱导下获得表达,经Western blot检测证实表达产物具有活性。以表达产物包被ELISA板,初步建立了特异、敏感的ELISA诊断方法。同时用表达产物免疫Balb/c小鼠,能产生一定的抗O型口蹄疫病毒的抗体。  相似文献
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