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1.
采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒A/Guangdong/3/96(H5N1)[GD3/96]神经氨酸酶(NA)基因,并将其克隆到pUC18质粒中进行测序。核苷酸序列测定结果为:NA基因全长为1410bp,共编码469个氨基酸,从pUCNA中切下NA基因片段,将其亚克隆到质粒pSY538的EcoR I位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的Sma I位点,然后切下同位含有NA及LacZ基因的片段,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的Not I位点,经限制性内切酶分析,PCR鉴定等,证明含有禽流感病毒NA基因的重组禽痘病毒转移载体已构建成功,从而为进一步筛选表达NA蛋白的重组禽痘病毒及探讨该蛋白的免疫原性鉴定了实验基础。  相似文献
2.
禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达   总被引:6,自引:2,他引:4  
为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的下游,再将含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2的NP基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体中,即得到同时含有HA和NP两种基因的重组转移载体pSY(HA NP)。将转移载体脂质体转染已感染禽痘病毒亲本株S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞。根据报告基因β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达,蓝白斑法筛选重组病毒,经数轮蚀斑纯化,PCR鉴定及West-ern-blot分析,结果表明所获得的重组病毒能高效表达AIVHA及NP两种蛋白。此研究为进一步研制更为有效的禽流感基因工程活病毒载体疫苗奠定了基础。  相似文献
3.
H9N2禽流感病毒中国分离株血凝素基因序列的初步分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
10株中国H9N2禽流感病毒分离株的血凝素基因分析表明,这些分离株间的亲缘关系较近,推测它们可能来源于同一种系,H9亚型分离株的HA1亚单位系统发育分析表明中国AIV分离株与97香港禽类市场上分离到的毒株不同,中国分离株中在HA切割位点上均未见到典型的高致病力毒株H5、H7所具有的一系列碱性氨基酸,其排列均为-PARSSGLF-,系统发育分析表明该10株属欧亚种系。  相似文献
4.
绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的病理学   总被引:4,自引:2,他引:2  
绵羊慢病毒 ( ovine lentivirus,Ov LV)有 3型。1型为溶解型 ,主要有流行于欧洲的梅迪 -维斯纳病毒( maedi- visna virus,MVV) ,即原型病毒冰岛株 ,以及美国的绵羊进行性肺炎病毒 ( ovine progressivepneumonia virus,OPPV) ,即 Ov LV美国株等。1型可引起淋巴组织样间质性肺炎 ( lymphoid intersti-tial pneumonia,LIP)与淋巴滤泡形成、淋巴细胞性乳腺炎和非化脓性脑 (白质 )炎 ,OPPV及某些MVV株还可引起非化脓性关节炎。2型为非溶解型或持久感染型 ,持久感染细胞培养但不溶解细胞单层 ,只形成极少量的合胞体。 2型可引起轻度 LI…  相似文献
5.
夏季奶牛热应激的预防措施   总被引:4,自引:0,他引:4  
奶牛要求最适宜的外界环境温度为 8~ 16℃ ,高于或低于这个临界温度 ,将会对奶牛产生一系列应激反应。在炎热的夏季 ,外界气温在 30℃以上的时间长达 3个月之久。在这种高温的环境下 ,奶牛表现呼吸加快 ,体温升高 ,散热量减少 ,食欲下降 ,产奶量降低 ,生理代谢紊乱 ,给生产带来很大损失。据研究 ,当气温从 2 5 9℃上升到 2 8 6℃时 ,奶牛标准奶产量下降 2 5 4%。因此 ,采取有效措施 ,消除夏季热应激对奶牛的影响 ,对保证奶牛高产、稳产具有重要经济意义。1 植树绿化夏天奶牛在运动场活动时间较长 ,搞好环境绿化 ,有助于改善牛场内部小…  相似文献
6.
3株鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因VP1的克隆及序列分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1:161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列.系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%~96.9%和95.4%~96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似性均分别低于75%和88%,表明3株病毒属于DHV-1,与变异株是不同的血清型.强毒DHV-1:161/79/V的VP1蛋白第49和第183位氨基酸为T和H,弱毒DHV-1:YH、HN为S和Q,推测这2处位点的改变可能与病毒的强弱有关;DHV-1和其变异株的VP1蛋白均没有保守的RGD序列;变异株N-DHV:90D、04G在第50和51位比DHV-1多2个氨基酸(Q和D),在第147和185位各缺失1个氨基酸(E和L),而在变异株DHV:AP-03337、AP-04009、AP-04114、AP-04203的第145和146位比DHV-1多了2个氨基酸(G、G);不同血清型的鸭肝炎病毒在46-64位、95-149位、180-223位抗原指数差别较大,推测这些位点的改变可能影响病毒的生物学特性.  相似文献
7.
经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-Blue^TMDNA)共转染sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA。提取重组病毒DNA,经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中,血凝实验、SDS-PAGE和Western blot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达。  相似文献
8.
赤羽病病毒核衣壳蛋白基因的表达纯化及活性鉴定   总被引:3,自引:1,他引:2  
为获得赤羽病病毒(Akabane virus, AKAV)核衣壳蛋白重组抗原,经RT-PCR扩增了OBE-1株的S节段,将其插入到pMD 18-T载体,然后用带有酶切位点的引物从该重组载体亚克隆出表达核衣壳蛋白的N基因,用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后与同样处理的表达载体pET-28a(+)进行连接,转化感受态细胞BL21(DE3).将筛选出的阳性克隆进行测序、IPTG诱导表达和融合蛋白纯化及活性鉴定.结果表明,N基因含有1个全长702 bp的ORF,编码233个氨基酸,通过SDS-PAGE和Western-blotting分析,证实重组菌株可高效表达有免疫活性的分子质量约27 ku的可溶性融合蛋白,用薄层扫描仪分析,其最高表达量占可溶性菌体蛋白总量的58.5%.工程菌经超声波裂解高速离心后,上清液在ProBondTM Purification System(含Ni2+)天然状态下纯化,可获得高纯度的融合蛋白.  相似文献
9.
禽流感病毒NA基因在巴斯德毕赤酵母系统中的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
采用PCR扩增禽流感病毒(AIV)NA基因,克隆入pMD18-T载体中,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9k中,构建了重组转移载体pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GSll5和筛选高拷贝重组转化子及筛选His^ Mut^ 表型转化子后,摇瓶培养,10mL/L甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE、Western-blotting、双向琼脂扩散试验、神经氨酸酶试验分析证明,获得了几株高效表达重组表达株,并且该重组NA蛋白具有免疫学活性。  相似文献
10.
绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
选12只自然感染绵羊慢病毒的成年新疆美利奴羊,用琼脂凝胶免疫扩散试验连续检查血清中OvLV沉淀抗体,发现抗体应答的类型发生转换,即只出现对病毒核心蛋白抗原的抗体,出现对病毒包膜糖蛋白的抗体,同时出现对p25和pg135二者的抗体互相转换。从试验羊的多个器官中分离到3株OvLV,分别命名为OvLV NXJ-55,NXJ-73和NXJ-0418株,其TCID50/mL值诊次为1×10^-5.6,1×1  相似文献
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