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1.
“拯救”NA-1株鹅源副黏病毒微型基因组的构建   总被引:1,自引:1,他引:0  
根据GenBank上已发表的NA-1株GPMV全序列设计并合成2对特异性引物,克隆得到GPMV的Leader及Tralier序列,与T7启动子、丁肝病毒核酶序列及T7终止子重叠PCR连接后,将连接产物克隆至改造的pVAXl载体中,并用增强型绿色荧光蛋白基因代替GPMV的整个编码区,只保留与病毒复制、转录和病毒包装相关的调控序列,酶切、测序及荧光鉴定后,与pCI-NP、pCI-P及pCI-L等3个辅助质粒共转染可表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系,结果绿色荧光蛋白得到表达,表明成功构建了"拯救"病毒的微型基因组.  相似文献
2.
鹅源副黏病毒NA-1株反向遗传操作体系的建立   总被引:1,自引:1,他引:0  
应用cRACE等方法扩增鹅源副黏病毒NA-1株cDNA5'末端和3'末端,分6段扩增得到病毒的结构基因序列,而后连接本室构建的TLH-T转录栽体,构建其cDNA全长克隆.在引入分子标签和验证辅助质粒的功能后,4质粒系统共转染VT7细胞系,成功拯救出了具有感染性的鹅副黏病毒.鹅源副黏病毒NA-1株反向遗传操作体系的建立为进一步深入研究该病毒基因组的功能以及新型疫苗的研发奠定了基础.  相似文献
3.
稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系的构建及鉴定   总被引:1,自引:1,他引:0  
设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒pT7-HN,经Western-blot和间接免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系。构建的VT7细胞系传30代还能够稳定的表达T7RNA聚合酶,为下一步建立有效的鹅源副黏病毒病毒反向遗传操作平台奠定了基础。  相似文献
4.
随着反向遗传学操作技术的发展,重组新城疫病毒载体成为当今病毒载体系统研究的热点之一.论文在综述了新城疫病毒的安全性评价、分子生物学特性的基础上,着重介绍了以新城疫病毒作为病毒载体表达外源基因应用于基础研究、疫苗研究和作为基因治疗载体等研究概况.  相似文献
5.
细菌人工染色体是近十几年来发展起来的一种新型DNA克隆载体系统,具有操作简单、遗传稳定、容量大等明显的优势。论文主要综述了细菌人工染色体载体系统在基础研究、基因治疗及病毒载体疫苗等反向遗传学方面的研究进展。  相似文献
6.
将2007年7月-2008年10月从吉林省猪群中分离到的3株H3N2亚型流感病毒,分别命名为A/swine/Jilin/A/2007(Sw/Jilin/A/07),A/swine/Jilin/B/2007(Sw/Jilin/B/07)和A/swine/Jilin/C/2008(Sw/Jmn/C/08).结合已知猪流感病毒(SIV)内部基因序列,设计合成6时特异性引物,通过RT-PCR技术分别扩增出6段内部基因,并与GenBank中相关序列进行比较,分析3株流感病毒内部基因的遗传进化关系.结果表明:在PB2、PB1、PA和NP的进化树上,3株H3N2分离株处于近代人源谱系内;在M和NS进化树中,Sw/Jilin/A/07和Sw/Jilin/B/07处于近代人源谱系内,而Sw/Jilin/C/08与禽源谱系内的H5亚型病毒亲缘关系最近.  相似文献
7.
以本课题组前期构建的鹅源副黏病毒NA-1株的全长感染性克隆为模板设计2对引物,用overlap PCR方法将其F蛋白裂解位点处的112、115和117位碱性氨基酸定点突变成为具有典型弱毒株特征的非碱性氨基酸。随后将突变后的F基因序列替换全长感染性克隆的对应序列,构建突变后的克隆质粒FL-cDNA-F′。将改造后的感染性克隆质粒与pCI-NP、pCI-P和pCI-L 3个辅助表达质粒共转染VT7细胞系,成功拯救出了致弱的鹅源副黏病毒。经过分子生物学鉴定,该毒株F基因序列具有典型的弱毒株特征。救获病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)为96h,表明救获的病毒毒力已被成功致弱,可以作为当前流行的鹅副黏病毒病的一个较为理想的疫苗候选株。  相似文献
8.
为研究在热应激环境下乳酸菌复合制剂对肉兔生长性能的影响,本试验设计了5组平行对照试验:常温对照组,常温+0.1%乳酸菌处理组,常温+0.2%乳酸菌处理组,热应激+0.2%乳酸菌处理组和热应激对照组。通过对试验后各生长性能指标的测定,结果表明热应激环境能够显著的降低肉兔的生长性能和成活率,而饲料中添加0.2%水平的乳酸菌复合制剂能够有效的降低热应激对肉兔生产性能的影响并显著的提高成活率。本研究为乳酸菌复合制剂在肉兔产业的进一步开发和应用提供了理论依据和数据支撑。  相似文献
9.
利用乳酸菌复合制剂在实际生产条件下饲喂规模化养殖的罗斯308肉鸡,通过对出栏肉鸡生长性能、屠宰性能和肉质性状等相关指标的测定和比较,探索饲料中添加乳酸菌复合制剂对规模化养殖肉鸡的实际生产效益和经济效益.试验共分为1日龄~21日龄和22日龄~42日龄2个阶段和5个处理组:Ⅰ组为全程饲喂基础日粮的对照组;Ⅱ组为全程饲喂0.5 mL/kg的乳酸菌复合制剂组;Ⅲ组处理方式为第1阶段饲喂0.5 mL/kg的乳酸菌复合制剂,第2阶段饲喂1 mL/kg的乳酸菌复合制剂;Ⅳ组处理方式为第1阶段饲喂1 mL/kg乳酸菌复合制剂,第2阶段饲喂0.5 mL/kg的乳酸菌复合制剂;V组为全程饲喂1 mL/kg的乳酸菌复合制剂组.通过对整个试验肉鸡出栏的产出效益和经济成本核算,本试验推定在罗斯308肉鸡生长的第1阶段(1日龄~21日龄)和第2阶段(22日龄~42日龄)分别饲喂1 mL/kg和0.5 mL/kg的乳酸菌复合制剂能够带来较好的经济效益.本研究为乳酸菌复合制剂在肉鸡养殖业的规模化推广和进一步产业化应用提供了参考.  相似文献
10.
为了探究宿主蛋白Hsp90AB1在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制过程中的功能,以RABV疫苗毒株HEP-Flury感染鼠神经瘤母细胞N2a为模型,分析Hsp90AB1对RABV复制的影响。采用RNA干扰的方式,发现Hsp90AB1基因敲降后可影响病毒基因的转录及其表达,而未影响病毒的反基因组水平以及病毒感染力,表明Hsp90AB1在转录或蛋白表达水平上影响RABV的复制。由此初步发现Hsp90AB1在RABV复制过程中的作用方式,为继续深入研究Hsp90AB1在RABV感染过程中的作用机制提供了基础数据。  相似文献
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