哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK真核表达载体构建及在毕赤酵母中的表达

摘要采用已构建的原核重组质粒pET30a-Om pK为模板,通过PCR扩增Om pK成熟肽基因片段,引入酶切位点后克隆至分泌表达载体pPIC9K,经Sal I线性化后,氯化锂法转化至毕赤酵母GS115中,并经G418遗传霉素筛选高拷贝酵母转化子,最后进行甲醇诱导表达,表达上清经SDS-PAGE电泳检测及Western-...     

红鳍东方鲀IL-2基因克隆及序列分析

鱼白细胞介素-2是近年来新发现的一类细胞因子.根据Bird等发表的河豚IL-2基因序列设计一对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增和克隆了红鳍东方鲀(Fugu rubripes)白介素-2的核苷酸序列.该cDNA序列由490nt组成,编码由149个氨基酸组成的前体蛋白.序列分析表明,红鳍东方鲀IL-2核苷酸序列和氨基酸序列与目前已知的其它物种IL-2的核苷酸及氨基酸的同源性分别位于34% ～44%和24% ～43%之间,N端存在长22个氨基酸的信号肽,含有形成2个链内二硫键的4个半胱氨酸.遗传进化分析表明,红鳍东方鲀IL-2在遗传进化上具有其独立性.     

红鳍东方纯IL-2基因克隆及序列分析

鱼白细胞介素-2是近年来新发现的一类细胞因子。根据Bird等发表的河豚IL-2基因序列设计一对特异性引物，通过RT—PCR方法扩增和克隆了红鳍东方纯（Fugum6却es）白介素-2的核苷酸序列。该cDNA序列由490nt组成，编码由149个氨基酸组成的前体蛋白。序列分析表明，红鳍东方纯IL-2核苷酸序列和氨基酸序列与目前已知的其它物种IL-2的核苷酸及氨基酸的同源性分别位于34％-44％和24％～43％之间，N端存在长22个氨基酸的信号肽，含有形成2个链内二硫键的4个半胱氨酸。遗传进化分析表明，红鳍东方纯IL-2在遗传进化上具有其独立性。     

抗重组鸡IL-2单克隆抗体的制备与鉴定

以纯化的重组鸡IL-2蛋白(rchIL-2)为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,最终获得4株持续且稳定分泌抗鸡IL-2单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为:1A12、4A3、3E7和4E1.4株MAb的抗体类型均为IgG1,轻链为κ;MAb的ELISA效价分别为5.12×105、1.02×106、2.56×105和4.09×106.Western-blot分析表明,所获得的1A12、4A3、3E7和4E1 4株单克隆抗体与rchIL-2均有反应.MAb的制备成功为进一步开展chIL-2的功能研究奠定了基础.     

锯缘青蟹呼肠孤病毒感染的组织病理和超微病理观察

运用石蜡切片及超薄切片技术,对感染呼肠孤病毒的锯缘青蟹组织进行组织病理和超微观察.石蜡切片结果显示:SsRV的侵染导致青蟹的肝胰腺、鳃、肠、心、胃和肌肉组织中产生明显组织病理变化,其中以肝胰腺、鳃组织和肠组织的病理变化最为明显,主要包括肝胰腺基底膜破损、肝细胞坏死,鳃腔堵塞,肠上皮细胞脱落,心肌与足肌纤维排列紊乱、断裂...     

鸭的类似鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析

通过RT—PCR和DNA测序技术，克隆和测定了绍兴麻鸭的一种类似鸡白细胞介素2(IL-2)基因的核苷酸序列，并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示，绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因的核苷酸长度由748个碱基组成，编码产物为由140个氨基酸残基组成的多肽，编码产物中含有21个氨基酸残基组成的信号肽。绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因的核苷酸及编码产物，与鸡和火鸡IL-2的一致性分别为71.4％～72．1％和55．0％～57．9％，与哺乳类等动物IL-2的一致性分别为22．1％～28．8％和14．3％～17．1％。对绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因蛋白编码产物的系统进化树分析表明，其编码产物与鸡和火鸡IL-2具有较远的亲缘关系。绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因编码产物的三维结构，预测由4个α-螺旋结构和2个β折叠组成。这些研究结果预示。鸭的类似于鸡IL-2基因编码产物，在生物学功能上与哺乳动物和其他禽类具有很大的差异。     

鸡白细胞介素-2研究进展

白细胞介素－2（interleukin-2,IL-2)主要是由激活的T淋巴细胞产生的一类重要的细胞因子，具有激活淋巴因子活化的杀伤细胞（LAK）和自然杀伤细胞，刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞产生细胞因子和促进细胞因子的繁殖以及刺激γδT细胞在体外生长等功能，因此它是免疫学研究的热点。近年来鸡IL－2基因克隆成功，使鸡IL－2的研究及应用得到一定的发展，同时也使鸡IL－2作为免疫佐剂和构建新型的基因工程疫苗呈现出一定的应用前景，本文主要对鸡IL－2研究取得的进展作一综述。     

RNA干扰研究进展

将双链RNA导入细胞内会引起与其同源基因的沉默,这种现象称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).作者就RNA干扰的作用机现,RNA干涉技术和RNA干扰的应用等方面的研究进展作一综述.     

水产养殖自身污染及其防治的探讨

结合水产动物的能量生态学、食物链及营养级等原理分析了目前水产养殖自身污染的现状以及存在的诸多问题。在总结了国内外研究最新动态的基础上，联系我国水产养殖实际，寻求有效的应对措施，并探讨了我国水产养殖自身污染防治的前景及其展望。     

禽类细胞因——新型免疫佐剂和免疫治疗剂

在食用性动物中使用抗生素饲料添加剂和抗微生物的化学药品就像一把双刃剑!一方面,它可以防止疾病的爆发、促进动物的生长;但另一方面,耐药性细菌的出现也引起了人们广泛的关注。因此,一些国家已经禁止在饲料中使用抗生素,为此,为了有效地控制疾病,肉类生产商正急于寻找一种新的替代物。细胞因子是在机体被感染或接种疫苗后产生的一类蛋白质,能够影响免疫应答的类型和水平,是一种绝佳的替代物。随着越来越多的禽类细胞因子基因的发现,在家禽中使用细胞因子成为可能。下面就禽类细胞因子最近的进展做一综述,并侧重阐述细胞因子作为免疫治疗剂和疫苗佐剂的功能及前景。