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表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究 总被引:5,自引:1,他引:5
表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果 相似文献
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从英国中心兽医实验室(CVL)引进禽流感病毒14种血凝素亚型(H1~H14)的标准毒株,经9~11日龄的SPF鸡胚增殖、传代后收取感染鸡胚的羊水及尿囊液,经1000xg离心15分钟后,收取上清作为免疫原。取8只12周龄SPF鸡分成A、B两组,进行人工感染鸡的抗体消长规律试验。选用H3毒株制备的免疫原,按1ml/只的剂量翅静脉接种A、B两组的8只SPF鸡,1周后B组的4只鸡复免一次,分别用HI和AGP试验测定2种方法免疫鸡的抗体水平.监测结果表明:经1次免疫的鸡(A组)于免疫后15天HI抗体升至最高,以后抗体逐渐下降,且产生的抗体个体差异不大,AGP试验结果只有于免疫后20~55天内全部为阴性;经重复免疫的鸡(B组),于初免后15~45天内HI抗体都维持较高水平,且产生的抗体个体差异不大,AGP试验结果在初免疫后1575天内全部为阳性。据此,我们根据禽流感病毒株毒力的强弱(参照其EID50,用纯化后的鸡胚尿囊液制备的免疫原,按05~25ml/只的剂量分别免疫12周龄SPF鸡,1周后加强免疫一次于二免后10~15天放血,制备出禽流感病毒14个血凝素亚型的分型血清,并有霍乱滤液(RDE)法对血清进行了处理。 相似文献
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禽流感RT-PCR诊断法的建立 总被引:6,自引:0,他引:6
根据禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Breslin/1902(H7N7)株的血凝素(HA)基因参考序列设计合成一对H7HA特异引物,并应用SDS-蛋白酶K法提取病毒RNA,建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AIVRNA的方法。应用此法对鸡胚培养的AIV尿囊液、SPF感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDS-76V)等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,AIV尿囊液RT-PCR全部阳性,SPF感染鸡粪便87份,RT-PCR检出69份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出11份,电镜检测了23份样品,仅检出2份阳性。非特异性对照样品经RT-PCR检测全部阴性。将AIV感染鸡胚尿囊液作10倍系列连续稀释,可检出稀释度为10-2的病毒尿囊液。RT-PCR最早检出时间为感染后第3天,而琼扩和电镜均是7天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间(只需8小时左右),可从分子水平上对AIV进行早期快速诊断和流行病学调查 相似文献
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禽流感病毒人工感染鸡抗体的监测及血凝素分型血清的制备 总被引:13,自引:1,他引:12
从英国中心兽医实验室引进禽流感病毒14种凝素亚型的标准毒株,经9-11日龄的SPF鸡胚增殖,传代后收取感染鸡胚的羊水及尿囊液,经1000xg离心15分种后,收取上清作为免疫原。取8保12周龄SPF鸡分成A,B两组,进行人工感染鸡的抗体消长规律试验。 相似文献
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中国禽流感流行株的分离鉴定 总被引:7,自引:2,他引:5
分别从广东、四川、新疆等地禽流感(AI)血检阳性、发病率高、产蛋率下降的鸡群中采集186份病料,先后分离到6株A型流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代,可凝集鸡红细胞,血凝价达160~1280倍。不被新城疫、减蛋综合症、败血支原体阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成琼脂扩散(AGP)抗原与禽流感标准阳性血清可出现白色沉淀线。分别将分离毒株与AI标准分型血清H1~H14、N1~N9进行HI、NI试验,结果川和川农株均为H4N6,西昌1和2株及Sh株均为H9N2,新疆石河子(石)株为H14N5。分离株分别做脑内接种致病指数(ICPI)、静脉接种致病指数(IVPI)测定,结果所有分离株ICPI介于024~148之间,IVPI介于015~056之间.通过电镜观察,可见直径为80~120nm球状或杆状典型的禽流感病毒.经联机检索,从新疆石河子AI阳性鸡场产蛋下降的鸡群中分离出的H14N5株为国内外首次从鸡中分离出的H14亚型禽流感病毒。将某单位送检的禽流感鹅体分离株(G1株和G2株)做了血清型和毒力测定,试验结果认定,G1和G2株均为A型禽流感病毒H5N1亚型,G1、G2株对鸡均达到高致病力毒株标准。 相似文献
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选择当地常用的来自不同厂家的6种新城疫IV系弱毒苗和3种I系苗,分别进行免疫效力比较试验。结果,IV系苗中,D苗与F苗组的HI抗体值显著高于其他各组;I系苗中,A苗组与B苗组的HI抗体值显著高于C苗组。以上各种新城疫疫苗免疫鸡群后,HI抗体值虽有差异,但均在临界保护值以上。本试验证明,新城疫的免疫失败或非典型新城疫的发生除要考虑疫苗本身质量外,外部环境及鸡群本身状态也是非常重要的因素。 相似文献
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禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因的克隆及其重组禽痘病毒转移载体的构建 总被引:10,自引:1,他引:9
采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒A/Guangdong/3/96(H5N1)[GD3/96]神经氨酸酶(NA)基因,并将其克隆到pUC18质粒中进行测序。核苷酸序列测定结果为:NA基因全长为1410bp,共编码469个氨基酸,从pUCNA中切下NA基因片段,将其亚克隆到质粒pSY538的EcoR I位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的Sma I位点,然后切下同位含有NA及LacZ基因的片段,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的Not I位点,经限制性内切酶分析,PCR鉴定等,证明含有禽流感病毒NA基因的重组禽痘病毒转移载体已构建成功,从而为进一步筛选表达NA蛋白的重组禽痘病毒及探讨该蛋白的免疫原性鉴定了实验基础。 相似文献
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