NDV单抗针对多肽抗原的鉴定

经对液氮保存的抗鸡新城病毒单抗杂交瘤细胞株进行复苏，再克隆，并用ＥＬＩＳＡ和ⅡＦ筛选，得到２４株分泌力较强的细胞株。将这些细胞株再接种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其胜利水进行预处理，测春ＥＬＩＳＡ效价、ＩＩＦ效价，并用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ测定它们所针对的中国标准强毒株Ｆ４８Ｅ８的多肽原表位。测得的结果均为针对血凝素－神经氨酸酶的单抗。     

应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌

根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因序列设计引物，对沙门氏菌属A－F各群中共15株沙门氏菌标准菌株、27株沙门氏菌现场分离菌株和其他10株非沙门氏菌菌株进行聚合酶链反应（PCR）扩增，结果沙门氏菌均出现495bp特异性DNA扩增条带，所有对照均未出现特异条带，提示这对引物具有很强的沙门氏菌属特异性。PCR敏感性试验显示，该体系能检出14pg以上的沙门氏菌DNA。通过对5种不同的DNA模板提取方法的比较，选择操作简便、快速、成本低廉的热裂解法。采用该方法。采用该方法，对生鲜奶样进行检测，经与国家标准卫生检验方法相比较，两者符合率达100％。     

鸡痘病毒基因组DNA复制非必需片段的鉴定

将中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株（２８２Ｅ４）蚀斑纯化，在ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞上增殖后，经超声波裂解，蔗糖梯度离心得到纯化病毒，以蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿、氯仿和水饱和乙醚抽捉，乙醇沉淀，得到ＦＰＶ基因组ＤＮＡ，后用ＥｃｏＲｌ消化，随机克隆到ｐＵＣ１８质粒中。限制性内切酶片段电泳分析结果表明，克隆到１０个不同大小的片段，根据酶切图谱分析，选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入标记基因（Ｐ１１一ＩａｃＤ筛选出３个复制非必需片段。为进一步构建表达外源片段重组质粒载体创造了良好的条件。     

沙门氏菌快速检测试剂盒的研制及其应用

在建立直接ＥＬＩＳＡ方法基础上，首次研制出检测沙门氏菌的单抗快速检测试剂盒。对现场分离菌株进行的双盲考核试验共做２８０个菌株，两种方法的总符合率为９４．６％。以２０％的脱脂乳为冻干保护剂，经冻干后，其效价和物理性状最佳，试剂盒批内和批间重复试验的变异系数小于１０％，试剂盒的稳定性较好。采用本试剂盒检测了３０５９份人的粪样，检测出１６６份阳性样品，比市站多检出７２份阳性样品。在对６１９份肉样、６８８份鱼粉、６００份奶样、６２０份蛋样检测中，比常规国标方法多检出１００株沙门氏菌。因此，以直接ＥＬＩＳＡ为基础构建的快速检测试剂盒在沙门氏菌检验中，具有重要实用价值。     

应用属特异单抗和分属噬菌体鉴定沙门氏菌分离株的比较研究

本研究应用属特异单抗和分属噬菌体对102株疑似沙门氏菌分离株进行鉴定,并以标准程序作验证。结果表明,属特异单抗ELISA反应阳性的77株菌株中,76株为沙门氏菌,1株为弗劳地氏柠檬酸杆菌;而分属噬菌体O-I裂解阳性的74株细菌中,72株为沙门氏菌,2株为大肠杆菌,同时出现了漏检。这预示着属特异单抗试剂在沙门氏菌鉴定和快速检验中有很广阔的应用前景。     

多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌

建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水中 ,煮沸提抽 ,制备样品DNA ,进行PCR检测。从实验中我们成功的扩增出 32 4bp的α毒素基因片段和 2 33bp的肠毒素基因片段。以人工污染样品 10倍系例稀释后进行检测 ,该方法的检测灵敏度达到 1.0× 10 4 CFU/g并对 5 8份猪粪便样品检测 ,获得 5 3株产气荚膜梭菌 ,分离率为 91%,其中 4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌 ,占整个分离菌株的 7.5 %。因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素 ,从而避免了使用动物作定型试验。     

沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原表位的定位

用淋巴细胞杂交瘤技术研制成４株沙门氏菌属特异单抗ＣＢ８，ｄｅ７，ｃｃ６，ＤＤ４，在免疫转印试验中，证实它们所识别的抗原表位位于鞭毛蛋白上，ＥＬＩＳＡ相加试验及竞争试验显示，ＣＢ８和ｃｃ６与ｄｅ７，ＤＤ４识别的抗原表位不同，表明鞭毛蛋白的属共同抗原具有多种表位的特性。用胰蛋白酶消化鞭毛蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果出现两条新带，分子量分别为４２０００（Ｆ４２），２７０００（Ｆ２７），长时间消化，最终只剩下Ｆ２７条带，它可抵制该酶的消化。对该酶切样品的免疫转印结果表明，沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原表位出现于Ｆ４２和Ｆ２７上，而相应的沙门氏菌分型Ｈ抗原单抗或因子血清识别的表位也在Ｆ４２和Ｆ２７上都得到了证实。这为沙门氏菌鞭毛蛋白抗原的多样性及结构和功能研究提供了证据。     

A型产气荚膜梭菌致奶牛腹泻的诊断与防制

20 0 1年 8～ 9月 ,江苏某奶牛场奶牛陆续发生腹泻 ,采用氟哌酸治疗一段时间之后 ,收效甚微 ,因而怀疑为由产气荚膜梭菌所致的腹泻 ,遂对其进行了实验室诊断和药敏试验 ,并采取了相应的措施 ,取得了较好的效果。现将内容报告如下。1　病料采集与细菌分离从发病奶牛群中随机采集病牛新鲜排粪 1 2份 ,用灭菌生理盐水做 1∶ 1稀释后 ,用酪蛋白 -硫酸亚铁 -环丝氨酸琼脂 ( TSC,购自德国 Merck公司 )平板划线分离 ,置厌氧培养罐 (购自 Merck公司 ) 37℃培养 2 4 h,TSC琼脂平板上长出多量疑似菌落 ,菌落形态为圆形、突起、边缘整齐、表面湿润…     

新城疫单抗ELISA试剂盒检测鸽新城疫病毒

用新城疫（ND）单抗酶联免疫（ELISA）试剂盒检测23例疑似ND的鸽泄殖腔棉拭样品，7份阳性样品用SPF鸡胚均会离到病毒，该病毒凝集鸡红细胞，并就抗新城疫病毒（NDV）阳性血清所抑制，其中4株病毒的MDT在48－68.6h之间，ICPI为1.55-1.85。试验结果表明所分离的病毒为NDV，亦表明ND单抗ELISA试剂盒能够检出鸽NDV，并可作为鸽群中NDV流行病学调查的有效手段。     

表达马立克氏病病毒CVI988／Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究

用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白B（gB）基因构建成重组鸡痘病毒（rFPV）。以MDV　GA或Md5和RBIB混合攻毒，在不同品种的鸡中评价rFPV－gB／R单价苗和与火鸡疱疹病毒（HVT）组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明，MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中，rFDV－gB／R均能提供免疫保护作用，且其中一种商品蛋鸡中rFPV－gB／R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用，均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出，rFPV－gB／R与常规疫苗一样，可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。