广西主要动物源性产品中磺胺二甲嘧啶残留调查与分析

为了解广西动物源性产品中磺胺二甲嘧啶（SM₂）残留情况，本研究采用磺胺二甲嘧啶化学发光酶免疫分析法（SM₂-CLEIA）对2013-2017年采集的4 637份动物源性产品进行检测，共检出超标样品122份，涉及鲜乳、猪肉、水产品和猪尿，其中超标猪尿92份，SM₂含量100.51~860.44 μg/kg，猪尿中抗生素残留会污染水体、土壤，再通过动植物的富集作用进入食物链，危害人类健康，应引起重视；而本次受检的水牛奶、鸡肝脏、鸭肝脏、鸭肉均合格。所有受检样品超标率逐年下降，同时规模化养殖场样品合格率高于农村散养户、超市高于农贸市场。不同年份超标样品含量以2014年最高。采用食品安全指数（IFS）对广西动物源性食品中SM₂残留风险进行评估，结果均远小于1，说明在广西地区，现有的SM₂残留对人体的潜在危害较低。     

广西山羊蓝舌病血清学调查及流行区域分布的影响因素分析

为了解广西地区山羊蓝舌病(BT)流行现状,本研究采用免疫扩散试验对采自广西11个地区的3 646份山羊血清进行BT血清学调查,结果表明,广西地区山羊群普遍存在BT感染,并且血清阳性率存在地域性差异,阳性率为6.3%～45.1%,平均阳性率为20.5%。对不同生长阶段山羊的血清阳性率进行统计,结果显示成年羊的阳性率高于羔羊,分别为22.1%和17.4%,这可能与成年羊接触媒介昆虫的机会较多有关。对BT流行区域分布与地理位置和气候等自然因素之间的相关性分析表明,广西山羊BT血清阳性率与地理位置有一定相关性,与年平均气温显著相关,与年平均降雨量无显著相关性,由此可见,地理位置和气温是BT流行病学的影响因素。     

狂犬病毒G基因主要抗原表位区（Rmg）的表达及纯化

【目的】对狂犬病毒Rmg基因进行克隆、表达、纯化及复性，以期获得表达量高、反应原性好的Rmg蛋白，为研制快速、直观、简便检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条奠定基础。【方法】用常规PCR从狂犬病毒基因组中克隆出狂犬病毒G蛋白的主要抗原表位基因Rmg，并将其插入原核表达载体pET-Trx中，构建原核表达质粒pET-Trx-Rmg，将pET-Trx-Rmg转化BL21（DE3）plysS，在IPTG诱导下进行表达。【结果】SDS-PAGE分析结果表明，Rmg基因在BL21（DE3）plysS中获得高效表达，表达量占菌体总蛋白的30.5%左右，并主要以不溶的包涵体形式存在，分子量约为51.7 kDa。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性，纯化后蛋白纯度达99.1%。经Western blotting检测，发现表达的Rmg蛋白能够与狂犬病毒高免血清发生特异反应，但与犬细小病毒（CPV）、犬瘟热病毒（CDV）阳性血清不发生反应。【结论】Rmg蛋白具有良好的抗原性，可用于研制检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条。     

猪伪狂犬病病毒gE抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg,检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg,血清最佳稀释度为1∶10,作用时间15 min,与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪布鲁菌(Brucella)阳性血清和PRVgE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带,与PRV标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果;试纸条在室温保存6个月,其特异性和敏感性没有明显变化;与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较,1 164份猪血清的符合率均为90.55%。制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。     

石龟嗜水气单孢菌的分离鉴定及药敏特性研究

从患病石龟上分离获得1株革兰氏阴性杆菌，菌体细长、无芽孢和荚膜，在山羊血琼脂平板上能形成明显的β-溶血圈。经小白鼠致病性试验、生理生化鉴定及16SrRNA序列分析，确定该分离株为致病性嗜水气单孢菌。经同源性及遗传进化分析发现，该菌株与嗜水气单孢菌B27、HSO2（Genbank登录号：FJ494900．1、FJ562211．1）同源性高达99．5％。而药敏试验表明，该分离株除了对赛福欣（复方恩诺沙星）、肠清（复方乳酸环丙沙星）2种药物高度敏感外，对大部分抗菌素均不敏感。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H-PRRSV)Nsp2基因的变异监测

收集2006 ～2010年来自广西12个地市的21份高致病性猪繁殖与呼吸综合征(H-PRRSV)阳性病料,克隆包含缺失区的Nsp2基因片段并登陆Genbank(登录号为HQ015350-HQ015370),经序列比较发现,该21株Nsp2序列具有与我国2006年爆发的H -PRRSV完全一致的缺失特征,广西H-PRRSV流行毒株Nsp2基因随着流行时间的推移朝着偏离猪高致病性蓝耳病代表毒株JXA1株的方向发展,在遗传进化树上呈地城性分布.此外,广西H-PRRSV毒株氨基酸逐渐发生变异,特别是2010年来源于3个不同地方的3个毒株5个位点均发生突变,即P19L、R33Q、R34F、,S431、E107K,这些位点的突变导致二级结构、亲水性、抗原指数和暴霉区域发生了变化.     

狂犬病毒G基因主要抗原表位区（Rmg）的表达及纯化

【目的】对狂犬病毒Rmg基因进行克隆、表达、纯化及复性,以期获得表达量高、反应原性好的Rmg蛋白,为研制快速、直观、简便检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条奠定基础。【方法】用常规PCR从狂犬病毒基因组中克隆出狂犬病毒G蛋白的主要抗原表位基因Rmg,并将其插入原核表达载体pET-Trx中,构建原核表达质粒pET-Trx-Rmg,将pET-Trx-Rmg转化BL21（DE3）plysS,在IPTG诱导下进行表达。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Rmg基因在BL21（DE3）plysS中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的30.5%左右,并主要以不溶的包涵体形式存在,分子量约为51.7kDa。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达99.1%。经Western blotting检测,发现表达的Rmg蛋白能够与狂犬病毒高免血清发生特异反应,但与犬细小病毒（CPV）、犬瘟热病毒（CDV）阳性血清不发生反应。【结论】Rmg蛋白具有良好的抗原性,可用于研制检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条。     

广西猪伪狂犬病的流行监测及防控工作重点

为调查猪伪狂犬病（PR）目前在广西的流行情况，于2006～2008年对广西13个市122个不同规模猪场进行流行病学调查，并对163份病料及61份血清进行检测。结果显示，163份病料经PCR检测出阳性病料6份，阳性率为3．7％；对6株广西PRV gE胞外基因进行克隆测序比较及遗传进化分析发现，广西PRV毒株变异不大，6株广西PRVgE基因与国内外其他毒株之间核苷酸序列同源性均很高，介于96．4％～100．0％之间，氨基酸同源性为93．6％～100．0％，亲缘关系较为密切，应为同一毒株遗传进化而来；61份血清经gE—ELISA检测出阳性血清7份，阳性率11．5％，表明部分猪场存在PRV隐眭感染。调查结果肯定了广西在PR防控工作中取得的成绩，提出做好免疫、加强监测、淘汰隐性感染猪、提高猪体免疫力、净化种猪群是今后PR防控工作的重点。     

广西“猪高热综合征”主要病原调查及PRRSVNsp2基因变异分析

收集广西境内39个市(县)137个不同规模猪场及农村散养户146份病料,经检测发现广西"猪高热综合征"主要病原以PRRSV变异株(NSP2基因缺失)为主,检出率高达59.59%,其次为PCA占41.78%,CSFV占4041%,SIV占10.27%,PRV、HPS均占2.05%.将来自广西不同地区的15株PRRSV变异株(包括1株经典株)与国内外参考毒株部分Nsp2序列进行同源性比较,结果发现广西PRRSV变异株Nsp2序列之间同源性为83.3%～100%,与国内其他变异株同源性为83.2%～98.6%.这些毒株与国内其他变异株有完全一致的缺失特征.广西PRRSV变异株可分为2个亚群,亚群Ⅰ主要以桂西北地区毒株组成,亚群Ⅱ主要以桂东南地区毒株组成.所有的广西PRRSV流行株与国内其他毒株一样均属于美洲型.调查结果显示,广西"猪高热综合征"主要病原PRRSV变异株与PCV、CSFV等其他病原菌混合感染十分严重.其中,二重感染、三重感染分别高达42.53%和22.99%.     

广西某市免疫猪瘟疫苗后出现猪群发病死亡的情况调查

广西某市五个县的部分猪场(养猪户)在2005年10月中旬至2006年2月使用某厂猪瘟疫苗免疫后,猪群陆续出现发病、死亡.对此,五县曾怀疑疫情是疫苗散播猪瘟强毒所致.经调查分析及实验室检测,结果排除了疫苗散播猪瘟强毒的可能性,现将情况报告如下.