斑马鱼在鱼类病原免疫学研究中的应用

斑马鱼全基因组测序已经完成,建立了多个专门的在线数据库,作为模式生物在遗传学、发育生物学等领域已得到了广泛的应用.本文介绍了斑马鱼用于鱼类病原免疫学研究的优点,包括个体发育过程透明、免疫系统较成熟,具有先天性和获得性2种免疫系统;多种鱼类来源的细菌和病毒在成年斑马鱼和胚胎中都能感染和复制,使其成为研究鱼类病原的入侵机制和宿主免疫应答的模式生物.同时,对当前已建立的鱼类细菌和病毒病原斑马鱼感染模型以及在疫苗方面的研究现状作简要概述.     

创伤弧菌铁调基因fur的原核表达及多克隆抗体制备

应用PCR方法克隆了创伤弧菌Vibrio vulnificus FJ03-X2株的铁调基因fur(Ferric uptake regulator),该基因片段大小为450bp,编码149个氨基酸;以pET32a为表达载体,构建了原核表达质粒pET32a-FUR,表达质粒测序结果表明目的基因与GenBank中报道的创伤弧菌fur基因的同源性达98%以上;诱导表达获得可溶性的重组表达蛋白rFUR。镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化rFUR,SDS-PAGE电泳分析其分子量约33kD。以纯化后的融合蛋白rFUR为抗原,4次免疫SD大鼠,制备抗rFUR蛋白大鼠多克隆抗体。用ELISA方法检测鼠多克隆抗体的效价达到1∶256 000,表明融合蛋白rFUR具有良好的免疫原性。     

华支睾吸虫病诊断学研究进展

华支睾吸虫病是主要流行于东亚地区的一种由华支睾吸虫所引起的寄生虫病,传统的病原学诊断方法有着明显的局限和弊病,免疫学和分子生物学的发展为诊断提供了新的途径。随着对诊断抗原、抗体研究的深入以及诊断方法的改进,华支睾吸虫病诊断的敏感性和特异性不断提高。该文着重对华支睾吸虫病的免疫诊断尤其是诊断抗原的研究进展简要综述。     

百鸟聚满树，原是禾雀花

每年3～5月,是禾雀花开时节,那下垂的花朵,似成串的禾雀．栖满枝头。 禾雀花又名白花油麻藤,属蝶形花科大型木质藤本：其表皮粗糙,由3片小叶组成复生叶片,它向上攀耙的本领极强,能高攀百米左杆。在森林中她到的野生植株．上部常凌架于悬崖峭壁或参天古木的树冠上．它的一串串花穗呈簇状下垂,每串拌有花朵20～40朵不等,如振翅欲飞的禾雀,含苞者则如雏鸟待哺。     

修剪模式对油茶采穗圃穗条性状及矿质元素的影响

【目的】研究了不同修剪模式对油茶采穗圃穗条性状及矿质元素含量变化的影响。【方法】采用轻剪、中剪和重剪3种模式对油茶8年生树体进行修剪,并测定新梢内N、P、K、Mg、Zn含量。【结果】长林3、4、18、21和53号在中剪,长林23和40号在轻剪时对穗条产量有利。修剪模式对穗条性状有显著或极显著影响,修剪前穗条性状变异系数依次为穗长(48.74%)有效芽数(38.50%)总芽数(25.94%)穗粗(22.52%),修剪后穗条性状在品种间发生分化,增大了长林4号的穗条长度、长林21号的穗条长度和粗度,长林40号的粗度,长林23号的总芽数和有效芽数变异范围;除长林23号外,修剪降低总芽数在穗条间的变化幅度,增大有效芽数变异系数。修剪模式对品种间的穗条矿质元素含量有显著影响;中剪时部位间差异较小,矿质元素含量相对较高。穗条性状间存在极显著相关性。镁元素与磷元素和氮元素存在着正向或者反向的显著相关,对长林53号穗条有效芽的生长存在影响。【结论】修剪对穗条的生长和发育具有较大的影响,在生产中应根据需求采取合理的修剪措施。     

CpG-ODN 2006对斑马鱼抗创伤弧菌感染的作用

为创建环境友好的免疫预防技术,分析CpG-ODN对斑马鱼抗创伤弧菌感染的作用,采用PBS(对照)和人工合成的CpG-ODN 2006(试验组)序列分别注射斑马鱼,48h后创伤弧菌FJ03-X2进行攻毒,收集斑马鱼的肠道和肾脏组织提取RNA,逆转录成cDNA,通过Real-time RT-PCR检测相关基因的表达。结果表明,24h后CpG-ODN2006组的免疫保护率高达70.0%;相关免疫基因表达检测结果发现CpG-ODN 2006组肠道中lysozyme、Myd88、tlrs和tnf的mRNA水平显著下调,而il1b和il10则显著上调;肾脏中的基因表达差异更为明显:lysozyme显著上调,il1b、myd88、tnf、ifng1-2、il10、il22均显著下调。结果表明CpG-ODN 2006通过调节斑马鱼肾脏及肠道中非特异性免疫相关基因的表达,维持免疫系统的平衡,增强抗创伤弧菌FJ03-X2感染的能力。     

嗜水气单胞菌外膜蛋白基因DNA疫苗载体的构建及分析

为构建嗜水气单胞菌的DNA疫苗载体,根据已发表的该菌外膜蛋白基因momp的核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR技术,扩增到嗜水气单胞菌L316的主要外膜蛋白基因,并插入到真核表达载体pcDNA3上,构建成DNA疫苗,命名为pcDNA3-POMP。以纯化的原核表达蛋白GST-POMP免疫SD大鼠制备抗血清,用ELISA测定抗体效价达到1∶100 000以上;用pcDNA3-POMP质粒转染293细胞,转染48h后收集细胞,提取细胞的RNA进行RT-PCR,检测到外源基因的表达。至此,初步完成嗜水气单胞菌DNA疫苗表达载体的构建,为进一步疫苗免疫和效价的检测奠定基础。     

创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达

创伤弧菌是导致鳗鲡产生体表溃疡死亡的重要致病菌。本研究克隆了创伤弧菌FJ03-X2株外膜蛋白基因(ompU),构建含该基因的原核表达载体,命名为pET-32a-ompU,将其转化到大肠杆菌E.coli中进行融合表达。37℃,0.5mmol.L-1的IPTG诱导4h,融合蛋白rompU以可溶形式表达,采用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE显示纯化后的rompU为与预期大小一致的单一条带。将纯化的rompU免疫SD级大鼠,ELISA检测收获的多克隆抗体血清效价,并通过Western-blot证实该OmpU多克隆抗体可以识别创伤弧菌FJ03-X2株中的天然外膜蛋白OmpU。     

新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin在毕赤酵母中的表达

前期采用差减杂交的方法筛选到新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin,其基因全长为477 bp,编码159个氨基酸,理论分子量约17.4 kDa。为了获得具活性的大量表达的抗菌肽,本研究利用毕赤酵母表达了elecilin。首先将elecilin基因克隆至酵母分泌表达载体pPICZaA,构建了重组分泌表达质粒pPICZaA-elecilin,电击转化毕赤酵母X-33。经Zeocin筛选和PCR鉴定,获得重组酵母菌,通过甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定,证实诱导后的培养基中存在与预期分子量大小相一致的蛋白,能被His-tag单克隆抗体识别,表明利用酵母成功表达了欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin。这为进一步研究该抗菌肽的功能及作为饲料添加剂的应用奠定了基础。