鲤 slc15a1基因的多克隆抗体制备及其表达分析

鲤(Cyprinus carpio)slc15a1基因是利用质子梯度逆浓度转运小肽和肽类似物到各种组织细胞内的一种低亲和力、高容量的转运载体,该基因在免疫反应中也起到重要作用.从蛋白质水平上探究slc15a1 (slc15a1a和slc15a1b)基因在鲤体内免疫应答机制中的变化,将slc15a1a和slc15a1b基...     

复凝聚法制备焦酚缓释微囊工艺优化

用复凝聚法制备以壳聚糖和海藻酸钠为囊壁、以焦酚为囊芯的缓释微囊,研究微囊形态、色泽及包埋率等指标来探究囊壁配比、囊芯浓度(1、2、3、4、5 mg/mL)和DMSO含量(17%、29%、38%、44%、50%)对焦酚缓释微囊制备的影响,以优化焦酚缓释微囊制备工艺。结果显示,壳聚糖与海藻酸钠复凝聚反应最佳含量比例为1:2;囊芯浓度为3 mg/mL焦酚缓释微囊呈球形,大小均匀,包埋率为51.56%,当助溶剂DMSO含量为17%时,包埋率达到93.35%,微囊大小均匀呈球形,色泽晶莹透亮。     

嗜水气单胞菌刺激下鲤血清质子转运载体15a2 (Slc15a2)的表达分析

鲤Slc15a2基因是利用质子梯度逆浓度转运小肽和肽类似物到各种组织细胞内的一种高亲和力、低容量的小肽转运载体,该基因在免疫反应中也起到重要作用。为解析鲤Slc15a2基因在嗜水气单胞菌侵染过程中对免疫应答机制的影响,本文从蛋白质水平上探究了Slc15a2（Slc15a2-1和Slc15a2-2）基因在鲤体内免疫应答机制中的变化。将Slc15a2-1和Slc15a2-2基因含有部分抗原决定簇的片段加入双酶切位点BamH Ⅰ和Hind Ⅲ后连接至pET-32a (+),构建表达载体,并成功制备鼠源Slc15a2-1和Slc15a2-2基因多克隆抗体。通过ELISA法检测嗜水气单胞菌感染后鲤血清中Slc15a2-1和Slc15a2-2的蛋白表达变化发现：1、感染后两拷贝的最高蛋白表达水平与正常组相比,分别增加了4.81和2.48倍;且Slc15a2-2的蛋白表达量与Slc15a2-1相比从0 h到48 h一直处于较高表达水平。2、从整体方面来看,在Slc15a2的两个拷贝之间具有相似的表达趋势,均为先升高后降低再升高再降低;但Slc15a2-1在3 h达到第一个表达高峰,而Slc15a2-2则在6 h达到第一个表达高峰。3、从6 h到24h的四个时期,Slc15a2-1和Slc15a2-2蛋白表达呈现互补的表达趋势,即在同一时期一个拷贝的表达量显著下降,另一个拷贝的表达量显著升高,但总体维持较高表达水平。结果表明：本实验制备的多克隆抗体具有较高的亲和力和特异性,在嗜水气单胞菌感染后,两个拷贝之间整体具有相似的表达趋势说明可能具有相似的基因功能;Slc15a2-1虽在3 h时率先做出低表达量响应,但与Slc15a2-1相比,Slc15a2-2在0 h至48 h之间具有显著的高表达量,可能是作为该基因拷贝中的主效基因,并且从6 h到24 h时,两个拷贝就一直呈现互补的表达方式,共同表达量维持在高水平,面对病原侵害时能做有效响应。本研究可为深入了解Slc15a2基因的鱼类免疫反应调控机制提供一定的基础。     

鲤slc15a1基因的多克隆抗体制备及其表达分析

鲤(Cyprinus carpio)slc15a1基因是利用质子梯度逆浓度转运小肽和肽类似物到各种组织细胞内的一种低亲和力、高容量的转运载体,该基因在免疫反应中也起到重要作用。从蛋白质水平上探究slc15a1(slc15a1a和slc15a1b)基因在鲤体内免疫应答机制中的变化,将slc15a1a和slc15a1b基因含有部分抗原决定簇的片段加入双酶切位点BamHⅠ和HindⅢ后连接至pET-32a(+),构建表达载体,并成功制备鼠源slc15a1a和slc15a1b基因多克隆抗体。采用ELISA法检测抗体效价,获得的鼠抗Slc15a1a和Slc15a1b的效价分别为8.1×10⁵和2.7×10⁵。在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后,Slc15a1a和Slc15a1b的最高蛋白表达水平与空白对照相比,分别增加了3.39和2.85倍,说明本实验制备的多克隆抗体具有较高的亲和力、特异性和较强的免疫原性,能够及时地诱导机体产生免疫应答。Slc15a1a在嗜水气单胞菌感染后3 h和6 h迅速做出高表达量响应,在12 h后开始出现表达水平的下降,但Slc15a1b在3~24 h时却一直维持着较稳定的高表达响应,表明Slc15a1a和Slc15a1b之间具有一定的表达差异。在感染过程中,Slc15a1a的表达量基本高于Slc15a1b,因此slc15a1a基因可能是slc15a1基因的主效基因,在鲤免疫应答过程中发挥重要作用。