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应用磁珠富集法构建兰州鲇（ Silurus lanzhouensis） CAG重复和GATA重复的微卫星文库，并分析其序列特征。兰州鲇基因组DNA经MseI酶切，选取200～800 bp的片段与生物素标记的探针（CAG）8和（GATA）6杂交，捕获到含有微卫星序列的目的DNA片段连接到pMD19-T载体，转化到大肠杆菌DH5α菌株中构建微卫星富集文库，经PCR检测筛选出阳性克隆进行测序。从126个阳性克隆中随机选取96个进行测序，获得59个微卫星序列（ GenBank登录号： KJ545973～KJ545998， KJ598088～KJ598120）。其中完美型31个（52.54％）、非完美型20个（33.9％）、混合型为8个（13.56％）。根据侧翼序列，成功设计48对引物，选取25对微卫星引物在10个个体进行扩增与多态性筛选，共获得10对多态性引物。结果表明，经优化的磁珠富集法能够高效地获得兰州鲇微卫星标记，这些标记将为兰州鲇种质资源保护、微卫星连锁图谱构建、经济性状的QTL定位及分子标记辅助选育奠定基础。 相似文献
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利用长片段PCR及T-A克隆技术,从兰州鲇(Silurus lanzhouensis)基因组DNA中首次克隆兰州鲇GH基因全序列并提交至Genbank获得登录号KM215221,同时,使用DNAstar等生物信息学软件进行序列分析研究。兰州鲇GH基因全长2 067 bp,由5个外显子和4个内含子组成,完整编码序列(Complete coding sequence,CDS)为603 bp。5个外显子大小分别为10、140、117、132和204 bp;4个内含子大小分别为229、103、565和103 bp;内含子与外显子的连接区序列遵循基因组成规则。编码区编码1条由200个氨基酸残基组成的蛋白质多肽。5个科8种鲶形目鱼类生长激素基因编码区序列同源性比较表明,它们之间GH基因编码区序列有较高的同源性,平均达到了92.4%,其中,兰州鲇和南方大口鲇之间的同源性最高,为99.5%,兰州鲇和革胡子鲇之间的同源性最低,为90.0%,并构建了系统发育进化树。同时也表明,GH基因编码区序列具有较高的保守性,系统发育研究中具有较高的参考价值。 相似文献
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