PCV-2d基因型的PCR-RFLP诊断方法的建立

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)有多个基因型,其中基因型d的感染率仅次于基因型b,建立PCV-2d基因型的PCR-RFLP诊断方法具有重要意义.根据NCBI中PCV2 Cap基因序列,设计1对特异性引物,并选择PCV-2d特异的酶切位点MSPI进行酶切,对酶切的体系和条件进行优化,同时进行敏感性、重复性试验.结果表明:PCR总体积25μL,模板量2μL,退火58℃,35个循环为PCR反应最佳条件,目的片段702 bp;MSPI酶能将PCV2d特异地切出2个条带474、228 bp.酶切体系为12.5μL、MSPI酶1μL、酶切时间1 h;该酶切体系的最低模板量为10 ng·μL-1,重复性好.送检的24份病料的PCV2d阳性率为33.3%.可见,本研究建立的PCV-2d基因型的PCR-RFLP鉴别诊断方法,特异、敏感.     

两种卵黄抗体不同提取方法的比较试验

卵黄抗体(Ig Y)具有许多其他类型抗体所没有的优点,其分离纯化的方法有有机物抽提法、盐析法、水稀释法等。试验分别用聚乙二醇(PEG)6000和氯仿来提取卵黄抗体,对其收集的抗体量和抗体效价进行比较分析。结果表明:100 g的卵黄用PEG6000法比氯仿法多收集71 m L卵黄抗体溶液,且PEG6000法的成本远远低于氯仿法,有很好的经济效益,而PEG6000法提取的卵黄抗体效价比氯仿法略低一个滴度。     

人工感染嗜水气单胞菌对日本鳗鲡非特异性免疫功能的影响

对注射嗜水气单胞菌菌液(3×106CFU·mL-1)的鳗鲡,进行外周血的血相、白细胞吞噬活性、血清抗菌活力等免疫学指标的测定.结果显示:在感染的初期,感染组外周血中白细胞和淋巴细胞数量、白细胞吞噬活性及血清抗菌活力较对照组均有显著提高,其中感染组的外周血的白细胞、淋巴细胞的数量与对照组相比均有显著提高,感染组粒细胞数量...     

黄芪多糖对罗非鱼肠绒毛形态结构及肠道免疫细胞的影响

本试验旨在探讨黄芪多糖对罗非鱼肠绒毛形态及肠道黏液细胞和上皮内淋巴细胞的分布和数量的影响.选用平均体重为47 g的岁非鱼共150尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复10尾鱼.对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂在基础日粮中添加500、1 000、1 500、2 000 mg/kg黄芪多糖的试验日粮.试验40 d后,从各组中随机抽取5尾罗非鱼进行解剖,取山肠管,固定、包埋并做成切片,并应用组织化学染色方法对各组肠管切片进行染色,观察肠绒毛形态结构、黏液细胞及上皮内淋巴细胞的分布和数量.结果表明:各组肠绒毛的结构郁较为完整;各试验组肠绒毛长度、隐窝深度和肌层厚度以及肠道黏液细胞和上皮内淋巴细胞的数量与对照组相比均有所提高,其中除前肠肌层厚度和前肠上皮内淋巴细胞数量外,1 000和1 500mg/kg组均较对照组有显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01).由此得出,日粮中添加黄芪多糖可提高罗非鱼肠绒毛长度、隐窝深度和肌层厚度,增加肠道黏液细胞和上皮内淋巴细胞的数最,且以1 000和1 500 mg/kg两个添加量效果较好.     

我国部分省(区)猪圆环病毒3型的分子流行病学研究

2016年美国报道了一种可引起猪皮炎肾病综合征、母猪繁殖障碍、呼吸道及高热等多系统炎症的新型病毒猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV-3)。为了解我国PCV-3的感染情况,针对PCV-3保守区设计一对特异性引物,对10个省106份样品进行PCR检测并测序分析。结果表明,10个省(区)中6个省(区)为阳性,地区阳性率60%;66个猪场中感染PCV-3的猪场为12个,猪场阳性率为18.2%;106个样品中检测PCV-3阳性的样品为19例,样品阳性率为18.0%。研究结果为更多了解PCV-3在我国感染情况提供了数据基础。     

地衣芽孢杆菌对肉鸡生长性能、抗氧化指标和血液生化指标的影响

本试验旨在探讨地衣芽孢杆菌对肉鸡生长性能、抗氧化指标和血液生化指标的影响.将240只1日龄健康肉鸡随机分为4组,每组4个重复,每个重复15只,Ⅰ组为空白对照组,饲喂基础饲粮;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组在基础饲粮中添加50、100和200mg/kg地衣芽孢杆菌制剂,试验期为28d,计算肉鸡平均日增重和平均日采食量,并采血分离血清,测定外周血中抗氧化指标和生化指标.结果表明,Ⅱ组平均日增重显著高于Ⅰ组(P<0.05),平均日采食量虽有所升高但差异不显著(P>0.05),料重比显著低于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱ组血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著高于Ⅰ组(P<0.05),丙二醛含量Ⅱ组显著低于Ⅰ组(P<0.05);血清中尿酸、尿素氮含量Ⅱ组显著低于Ⅰ组(P<0.05),白蛋白和总蛋白的含量显著高于Ⅰ组(P<0.05),胆固醇含量和碱性磷酸酶活性各组间均差异不显著(P>0.05).因此,饲粮中添加地衣芽孢杆菌50mg/kg能提高28d肉鸡的生长性能和抗氧化机能,降低血液中尿酸和尿素氮含景,提高血清总蛋白、白蛋白含量.     

日本鳗鲡消化道肥大细胞组织化学的研究

研究日本鳗鲡（Anguilla Japonica）消化道组织中的肥大细胞组织化学性质，观察肥大细胞胞浆颗粒的异质性。采用改良甲苯胺蓝（MTB）、阿利新蓝-沙黄O（AB／SO）、甲基绿-派洛宁（MG—P）、和天青Ⅱ-伊红-瑞氏混合液等4种组化染色法。用阿利新蓝-沙黄O染色法显示日本鳗鲡消化道的肥大细胞效果较好；甲基绿-派洛宁（MG—P）、和天青Ⅱ-伊红-瑞氏混合液染色效果一般，被染的肥大细胞数量很少；改良甲苯胺蓝甚至观察不到肥大细胞。日本鳗鲡肥大细胞数量不多，主要分布于食管、胃和肠道等部位黏膜层的黏膜上皮下方、固有层结缔组织，少量分布在黏膜下层结缔组织，并且有沿血管周围分布的特点；肥大细胞体积小，且多呈圆形、椭圆形、梭形及不规则形。AB／SO染色法效果最好，适用于日本鳗鲡肥大细胞的鉴定；改良甲苯胺蓝染色法不适合于日本鳗鲡肥大细胞的鉴定。     

发酵时间和料水比对豆粕发酵的影响

采用凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌混合菌种发酵豆粕,研究发酵时间和料水比对发酵豆粕营养成分的影响,以确定豆粕适宜的发酵参数.结果表明:(1)与发酵48 h组比,发酵72 h组的(游离氨基酸+寡肽)/粗蛋白质极显著提高(P0.01),p H极显著降低(P0.01);(2)料水比为1∶0.70组的寡肽/粗蛋白质、游离氨基酸/粗蛋白和(游离氨基酸+寡肽)/粗蛋白质极显著高于料水比为1∶0.40和1∶0.55组(P0.01),p H极显著低于料水比为1∶0.40和1∶0.55组(P0.01),活菌数显著高于料水比为1∶0.40组(P0.05),多肽/粗蛋白质极显著高于料水比为1∶0.40组(P0.01).结论:采用凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌混合菌种发酵豆粕,其合理的发酵时间为72 h,料水比为1∶0.70.     

分泌抗金黄色葡萄球菌细菌素乳酸菌的分离鉴定

为分离和筛选产抗金黄色葡萄球菌乳酸菌素的优势乳酸菌,利用乳酸菌分离培养基MRS从收集的各种腌制菜汁中分离培养乳酸菌,通过细菌培养特性、革兰氏染色特点、生理生化特性初步鉴定,同时根据Genbank中乳酸菌的16SrDNA序列设计特异性引物,采用PCR方法进一步鉴定,并以金黄色葡萄球菌为指示菌对乳酸菌的发酵上清液进行抑菌特性研究。结果表明,从腌渍菜汁中分离获得90株产酸菌,通过形态学、生理生化特性和PCR鉴定,结果73株产酸菌为乳酸杆菌;分泌产物抑菌试验表明,有10株菌具有抑制金黄色葡萄球菌活性,经酸排除和过氧化氢排除试验,仍然有5株乳酸菌的分泌产物具有抑制金黄色葡萄球菌活性。可见,从腌渍菜汁分离到的乳酸菌具有抑制金黄色葡萄球菌活性的特性,主要是通过分泌乳酸菌素来发挥作用。     

不同禽流感病毒含量的新-流二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平的监测

将未浓缩的新城疫抗原分别与未浓缩的、浓缩3倍、浓缩6倍的禽流感抗原混合,并制备成三组鸡新城疫、禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗（简称新-流二联灭活疫苗）,分别免疫21日龄SPF鸡,每羽0.3 mL,同时设置未免疫的空白对照组,免疫组与对照组均在免疫前及免疫后7、14、21、28、35 d进行采血,检测新城疫和禽流感抗体。结果发现,各免疫组在免后不同日龄的新城疫抗体基本一致,禽流感病毒抗原浓缩倍数越高（即禽流感病毒含量越高）的新-流二联灭活疫苗,免后14、21 d的抗体也越高;从免后21 d开始,各免疫组的禽流感抗体水平差异逐渐减小,免疫后禽流感抗体水平的高低可以反映该疫苗的免疫效果。试验结果表明,该疫苗可以通过浓缩提高抗原病毒含量的方法来提高免后早期抗体水平,取得良好的早期免疫效果。