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1.
为研究鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因的序列特征,本研究应用PCR扩增得到鼠伤寒沙门菌SL1344株的5'-nucleotidase基因片段,利用在线网站和DNAMAN 6.0.3.48软件进行其核苷酸和氨基酸序列的同源性分析。然后将目的基因亚克隆至原核表达载体p ET32a构建重组表达质粒(pET32a-5'-nucleotidase),转入大肠杆菌Rosetta中经IPTG诱导表达,亲和层析法纯化后采用SDS-PAGE和western blot进行分析。采用酶切活性试验分析重组蛋白的核酸酶活性。结果显示,鼠伤寒沙门菌SL1344株5'-nucleotidase基因为1 482 bp,5'-nucleotidase核苷酸序列与其它22种微生物的5'-nucleotidase及其类似物的同源性较低,最高仅为52.8%。理论上蛋白的分子量为57.18 ku,编码523个氨基酸。SDS-PAGE和western blot结果显示5'-nucleotidase重组蛋白约72 ku,且以可溶性和包涵体两种形式表达。同时,酶切活性试验结果显示重组5'-nucleotidase蛋白具有降解DNA的能力。本实验克隆了鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因,并表达得到了具有核酸酶活性的重组蛋白,为进一步研究5'-nucleotidase基因在鼠伤寒沙门菌感染中的作用奠定基础。 相似文献
2.
6种中药成分对猪传染性胃肠炎病毒的体外抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】为探讨连翘苷等6种中药成分抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的作用机制,明确其体外抗病毒作用效果,为抗TGEV的药物筛选提供依据。【方法】利用动物细胞培养技术,采用MTT比色法和细胞病变(CPE)观察法相结合,测定连翘苷、连翘苷元、绿原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚6种中药成分不同浓度下对猪睾丸细胞(ST)的毒性作用,通过观察细胞CPE情况,确定药物对细胞作用的最大安全浓度;同时测定病毒的TCID_(50),用细胞维持液配成100·TCID_(50)病毒悬液备用;将6种药物在最大安全浓度范围内连续2倍倍比稀释后,分别采用先感染病毒后加药、先加药后感染病毒、药与病毒混合后感染细胞3种不同作用方式进行体外增殖抑制试验,各试验组均设置正常细胞对照组和病毒对照组,每组设置3个重复,通过酶标仪测得630 nm处OD值,计算出不同作用方式下中药成分分别对TGEV的抑制率,筛选出抗TGEV活性较好的中药成分,并分别记录抗病毒效果最佳时药物的浓度;6种中药成分与病毒作用后,测定TGEV的病毒滴度并进行比较分析、RT-PCR鉴定各个药物单体对病毒RNA合成的抑制情况,进一步明确各中药成分对TGEV的抑制作用。【结果】连翘苷、连翘苷元、绿原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚的最大安全浓度分别为320、200、80、125、100、200μmol·L~(-1);抗病毒效果最佳时药物的浓度分别为:160、100、20、62.5、25、100μmol·L~(-1)。根据Karber法计算出初始TGEV的TCID_(50)为10~(-6.25)/0.1 m L;6种中药成分对TGEV在ST细胞上均有一定的增殖抑制作用,其中咖啡酸浓度为62.5μmol·L~(-1)时与100·TCID_(50)病毒混合作用后的病毒增殖抑制效果最好,相互作用72 h时,细胞形态依然能够保持圆滑、无固缩、完整,且细胞间轮廓清晰,仅有少量细胞脱落、死亡;此时测上清病毒的TCID_(50)为10~(-3.75)/0.1 m L,结果显示咖啡酸组病毒含量比病毒对照组10~(-6.45)/0.1 m L差异极显著(P0.01);通过酶标仪测得630 nm处OD值计算出抑制率能够达到84.4%,咖啡酸直接灭活病毒作用极其显著。其次是连翘苷、连翘苷元、绿原酸、丹皮酚及丁香酚,其病毒滴度分别为:10~(-4.75)、10~(-5.55)、10~(-5.55)、10~(-5.65)、10~(-5.75)/0.1 m L,但是这几种中药成分对病毒的抑制作用不够显著,抑制率大多在50%以下。另外,各中药成分对TGEV在ST细胞上的增殖抑制作用均为对TGEV的直接灭活作用最好,其次为对TGEV吸附阻断作用,最后为对TGEV的复制阻断作用。RT-PCR鉴定中药成分对病毒抑制作用,结果显示咖啡酸组条带与病毒对照组相比较暗,病毒效价较低,对病毒抑制作用效果显著;其次是连翘苷、连翘苷元、绿原酸、丹皮酚及丁香酚。【结论】6种中药成分在ST细胞上对TGEV均有一定的增殖抑制作用,其中咖啡酸直接灭活病毒作用最显著,有望被开发成抗病毒药物。 相似文献
3.
猪繁殖与呼吸综合征免疫猪群发病原因分析及防控 总被引:1,自引:0,他引:1
猪繁殖与呼吸综合征是目前严重危害养猪业发展的重要疫病之一。本文对猪繁殖与呼吸综合征免疫猪群依然发病的原因进行初步探讨,提示该病的有效防控必须依赖于基础和临床研究的紧密结合。 相似文献
4.
为探索人α-防御素-3(HNP-3)基因在兔乳腺中特异性表达的可行性,将HNP-3基因与大鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5′端调控区序列融合,定向克隆到PEGFP-1表达载体EGFP基因上游,在EGFP基因3′端加上His标签蛋白基因序列,构建了HNP-3基因乳腺定位表达载体pEGFP-WAP-HNP-S,将pEGFP-WAP-HNP-S与脂质体包裹后通过乳腺导管注射法转入妊娠母兔乳腺中,Westernblot和ELISA检测HNP-3融合基因在乳腺中表达和融合蛋白的表达水平,并用Ni亲和层析柱进行纯化。结果表明:分娩后初乳中即有分子质量为40kD的HNP-3融合蛋白表达,分娩后第4d达到高峰,表达量为265ng/mL。实验证明HNP-3融合基因在乳腺组织中能够特异性的表达。 相似文献
5.
适宜于实验教学的动物组织总RNA提取的操作方法 总被引:1,自引:0,他引:1
为探索适宜于实验教学的动物组织总RNA的提取方法,采用氯仿处理实验器皿、耗材和水以降低外源性RNA酶对RNA的降解作用。结果表明,操作过程中合理利用氯仿能够有效降低外源性RNA酶的污染;与DEPC水处理效果相比,提取的总RNA均可用于分子生物学研究和RT-PCR扩增,但使用氯仿处理更为安全。 相似文献
6.
7.
8.
此试验研究了合生元对1~35日龄艾维因肉鸡生长性能和免疫功能的影响。结果表明:合生元组在整个试验周期的平均体重均较对照组和中草药组极显著提高(P〈0.01),但与芽胞杆菌组差异不明显(P〉0.05)。日增重仅在0~5周差异极显著(P〈0.01),合生元组的日增重仅在第2周龄较茅胞杆菌组极显著提高(P〈0.01),在0~4周龄,均较芽胞杆菌组和中草药组差异显著(P〈0.05)或极显著(P〈0.01)。在料肉比方面,1~5周龄合生元组均比对照组、芽胞杆菌组,中草药组极显著降低(P〈0.01),但各周龄合生元组与茅胞杆菌组无明显差异(P〉0.05),合生元组与中草药组除了第5周龄无明显差异(P〉0.05),其余各周龄均差异显著(P〈0.05)或极显著(P〈0.01)。在免疫方面,合生元组的胸腺、法氏囊、脾脏指数均有不同程度的提高,新城疫效价较其它各组均极显著提高。 相似文献
9.
10.
应用PCR技术从鸡输卵管组织基因组中扩增出了1.00kb的鸡卵清蛋白基因5‘端调控区序列。序列分析表明,该区域含有TATA框及激素识别位点,具备输卵管定位表达的调控能力。为外源基因在鸡输卵管中的定位表达奠定了基础。 相似文献