酶制剂在水产动物饲料中的应用

<正>酶是活细胞产生的具有特殊生物催化功能的生物大分子物质(蛋白质或RNA),它广泛分布于动物、植物和微生物体内,参与机体的各种生化反应。酶制剂是一种以酶为主要功能因子,通过特定生产工艺加     

大黄素、维生素C及其配伍对团头鲂感染嗜水气单胞菌后生理生化指标的影响

为综合评价大黄素、高剂量维生素C及其配伍对团头鲂(Megalobrama amblycephala Yih)抗嗜水气单胞菌感染能力的影响,选取1 200尾健康的团头鲂,体质量为(133.44±2.11)g,随机分成4组,其中1组为对照组,投喂基础日粮,另外3组在基础日粮中分别添加60mg/kg大黄素、700 mg/kg维生素C、60mg/kg大黄素+700mg/kg维生素C(配伍组).饲养60 d后,经腹腔注射感染嗜水气单胞菌,并在攻毒前后检测团头鲂血液和肝脏的生化指标以及肝脏2种热休克蛋白70s(HSP70s)mRNA的表达水平;另从各池中取10尾鱼进行同样的攻毒试验,统计攻毒后各时间点鱼的累积死亡率.结果表明,攻毒后,与对照组相比,大黄素、维生素C组不同程度地提高了血清总蛋白(TP)、溶菌酶(LSZ)和碱性磷酸酶(AKP)的水平,肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性以及HSC70和HSP70 mRNA的表达水平,降低了血清皮质醇(COR)、血糖(GLU)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、甘油三酯(TG)以及肝脏丙二醛(MDA)的水平;配伍组中,这些指标的变化趋势虽与上述类似,但大多与对照组的差异不显著(P＞0.05),且未表现出协同增效作用.此外,各组鱼血清胆固醇(CHOL)的含量在攻毒前后的差异均不显著(P＞0.05).统计也表明,大黄素和维生素C组鱼的累积死亡率在攻毒后24 h、48 h均显著低于对照组(P＜0.05),而配伍组试验鱼的累积死亡率与对照组差异均不显著(P＞0.05).由此可见,在基础日粮中添加大黄素60 mg/kg或维生素C 700 mg/kg,可提高鱼体的非特异性免疫力、抗氧化能力以及2种HSP70s mRNA的表达水平,增强鱼体抗病原菌感染的能力.二者配伍则效果不佳.     

小肽吸收机制及其在水产动物饲料中的应用

综述了小肽的概念、分类、小肽的吸收机制和特点，并就小肽制品在水产动物饲料中的应用进行了详述，最后简述了影响水产动物利用小肽的因素以及小肽的研究现状和前景。     

团头鲂 HSP70 cDNA 的克隆、序列分析以及热应激对其 mRNA 表达的影响

采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出团头鲂(Megalobrama amblycephala)肝脏热休克蛋白70(HSP70)基因全长cDNA序列,共2 224 bp,包括135 bp5'非翻译区、1 932 bp阅读框以及157 bp 3'非翻泽区[不包括Poly(A)].阅读框共编码643个氨基酸,分子量计算值为70.53 kD,理论等电点为5.25.该HSP70基因在翻译区不含内含子,符合诱导型HSP70的特征.团头鲂HSP70氨基酸序列中含有HSP70家族的3个签名序列以及细胞质特异性调控基序EEVD等.同源性分析表明,团头鲂HSP70氨基酸序列与斑马鱼等脊椎动物的相似性高达84.0%以上,与无脊椎动物果蝇的相似性也高达73.4%.生物信息学分析显示,团头鲂HSPTO基因所编码的蛋白质以亲水性区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点,无信号肽,无跨膜区域,为非分泌型蛋白;同时还含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点、N-肉豆蔻酰化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号转导与调控中发挥重要作用.该蛋白含有2个部分重叠的双向核定位序列,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,空间结构包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域.应用实时定量PCR研究高温(34℃)应激对团头鲂HSP70 mRNA表达的影响.结果表明,在热应激过程巾肝脏HSP70 mRNA水平呈先升高后下降的变化趋势,说明该基因的表达受热应激调控,本实验克隆的序列为诱导型HSP70 cDNA.     

姜黄素对草鱼生长性能、抗氧化应激能力及核因子 E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路相关基因表达的影响

本试验旨在研究姜黄素对草鱼生长性能、抗氧化应激能力以及核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路相关基因表达的影响。选择初体质量为(5.11±0.08) g的草鱼幼鱼525尾,随机分为5组(每组3个重复,每个重复35尾),分别饲喂在基础饲料中添加0(对照)、200、400、600和800 mg/kg姜黄素的5种饲料。试验期60 d。饲养试验结束后,每重复取15尾规格基本一致的草鱼,每尾鱼腹腔注射10 mg/kg BW敌草快,进行急性氧化应激试验,在注射前(0 h)、注射后24 h时分别采样,检测草鱼血清和肝脏相关的生理生化指标,以及肝脏抗氧化相关基因的mRNA表达水平。结果表明:1)随着饲料中姜黄素添加量的增加,草鱼幼鱼的增重率、特定生长率和成活率均先升高后下降,而饲料系数和肝体指数则先下降后升高,当饲料中姜黄素添加量为400、600 mg/kg时草鱼的生长性能较佳,而脏体指数和肥满度在各组间的差异均不显著(P0.05)。2)在草鱼注射敌草快前,其血清皮质醇(COR)、葡萄糖(GLU)含量及谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性在各组间均无显著差异(P0.05);在注射敌草快24 h后,草鱼血清上述指标随着饲料中姜黄素添加量的增加呈先下降后升高的变化趋势,当饲料姜黄素添加量为400、600 mg/kg时达到较低水平,显著低于对照组(P0.05)。3)在草鱼注射敌草快前、注射24 h后,随着饲料中姜黄素添加量的增加,草鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,总抗氧化能力(T-AOC)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,Nrf2、铜与锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、CAT、GSH-Px和诱导型热休克蛋白70(HSP70) mRNA表达水平均呈先升高后下降的变化趋势,而肝脏活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)mRNA表达水平均呈先下降后升高的变化趋势,当饲料姜黄素添加量为400、600 mg/kg时,这些指标分别达到较高或较低的水平。由此可见,饲料中添加姜黄素400、600 mg/kg可促进草鱼幼鱼的生长,降低饲料系数,提高鱼体抗氧化应激能力,对敌草快诱导的急性氧化应激损伤具有保护作用,并可激活Nrf2/ARE信号通路相关基因的表达。     

露水草粉碎粒度和添加水平对日本沼虾生长性能、肝胰腺消化酶活性及非特异性免疫指标的影响

本试验旨在研究富含蜕皮激素的露水草(Cyanotis arachnoidea C.B.Clarke)对日本沼虾生长性能、肝胰腺消化酶活性及非特异性免疫指标的影响。试验1:分别将粉碎粒度为10、30、50和180μm的露水草添加到基础饲料(不含露水草)中,并使饲料中蜕皮激素含量均为10 mg/kg;试验2:将粉碎粒度相同(粉碎粒度为180μm)但蜕皮激素含量不同的露水草添加到基础饲料中,使饲料中蜕皮激素含量分别为3.30、6.60、13.20和26.40 mg/kg。将配制的8种试验饲料分别饲喂初始体重为(0.08±0.01)g的日本沼虾,同时试验1和试验2中各设1个饲喂基础饲料的对照组。每种饲料设3个重复,每个重复70尾,试验期60 d。饲养试验结束后对各组日本沼虾进行嗜水气单胞菌感染试验。结果显示:在试验1中,与对照组相比,添加不同粉碎粒度露水草组日本沼虾的特定生长率(SGR)和增重率(WGR)均显著升高(P0.05),饲料系数(FCR)显著降低(P0.05);成活率(SR),肝胰腺指数(HSI),肝胰腺胃蛋白酶、类胰蛋白酶和淀粉酶活性,血细胞总数(THC),血淋巴吞噬活性(HPA)以及血浆超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(AKP)活性各组之间无显著差异(P0.05);各组日本沼虾经嗜水气单胞菌处理后的累积死亡率无显著差异(P0.05)。在试验2中,与对照组相比,6.60 mg/kg蜕皮激素组和13.20 mg/kg蜕皮激素组的WGR和SGR显著升高(P0.05),FCR显著降低(P0.05);26.40 mg/kg蜕皮激素组的W GR、SGR、SR和HPA显著低于对照组(P0.05),其WGR和SGR也显著低于其他添加露水草组(P0.05);3.30 mg/kg蜕皮激素组、6.60 mg/kg蜕皮激素组、13.20 mg/kg蜕皮激素组之间W GR和SGR差异不显著(P0.05);各组日本沼虾的HSI,肝胰腺胃蛋白酶、类胰蛋白酶和淀粉酶活性,THC以及血浆SOD、AKP活性的差异均不显著(P0.05);26.4 mg/kg蜕皮激素组经嗜水气单胞菌处理后的累积死亡率与其他组相比显著升高(P0.05)。由此可见,饲料中添加露水草使蜕皮激素含量达到6.60~13.20 mg/kg时对日本沼虾具有显著的促生长作用,日本沼虾对蜕皮激素的吸收和露水草的粉碎粒度无显著相关性。露水草主要药用成分蜕皮激素对日本沼虾无免疫增强作用,且露水草蜕皮激素过量(饲料中蜕皮激素含量为26.4 mg/kg)还将导致日本沼虾SR和抗菌能力降低。     

饲料中蝇蛆粉用量对青鱼生长、体成分和消化酶活力的影响

用不添加蝇蛆粉的对照饲料和添加1.0%、1.8%、2.6%、3.4%、4.2%、5.0%蝇蛆粉的6种试验饲料,分别饲喂初重为(127.42±4.83)g的青鱼8周,研究蝇蛆粉对青鱼生长、体成分和消化酶活力的影响。试验结果表明:摄食添加5.0%蝇蛆粉组青鱼终末体重和特定生长率最高,饲料系数最低;饲料中添加蝇蛆粉可降低青鱼肝体比和脏体比,当添加量为5.0%时降至最低且与对照组差异显著(P0.05)。摄食添加4.2%蝇蛆粉组,青鱼全鱼粗蛋白含量达到最大值,与对照组和蝇蛆粉添加量为1.0%、1.8%组差异显著(P0.05),添加量为3.4%、4.2%、5.0%组鱼体肌肉中的粗蛋白含量较对照组显著升高(P0.05)。摄食添加4.2%蝇蛆粉的试验饲料后,青鱼肠道和肝胰脏蛋白酶活力以及肠道淀粉酶活力均达到最大值且与对照组差异显著(P0.05),摄食5.0%蝇蛆粉组其肠道和肝胰脏脂肪酶活力达到最大值与对照差异显著(P0.05)。因此,在试验条件下,饲料中添加4.2%~5.0%的蝇蛆粉能促进青鱼的生长、提高青鱼肠道和肝胰脏消化酶活力,提高全鱼蛋白含量改善肌肉品质。     

青鱼对8种饲料原料中营养物质的表观消化率

本试验旨在研究青鱼(Mylopharyngodon piceus)对国产鱼粉、蝇蛆粉、玉米蛋白粉、大豆粕、花生粕、棉籽粕、菜籽粕和米糠8种饲料原料干物质、粗蛋白质、氨基酸、粗脂肪、总磷和总能的表观消化率。试验饲料由70%基础饲料和30%待测饲料原料组成,并以0.1%的三氧化二钇(Y2O3)为外源指示剂。选取平均体重为(60.17±1.28)g的青鱼270尾,随机分成9组,每组3个重复,每个重复10尾鱼。对照组试验鱼饲喂基础饲料,试验组试验鱼分别饲喂1种试验饲料。饲喂1周后采用自排法收集粪便待测。结果表明:8种饲料原料的干物质、粗蛋白质、粗脂肪、总磷、总能以及总氨基酸的表观消化率的范围分别是62.17%～86.47%、83.34%～95.84%、78.93%～100.06%、37.33%～81.99%、66.75%～89.86%、86.33%～96.58%。在8种饲料原料中,玉米蛋白粉的干物质、总磷和总能的表观消化率最高,而大豆粕的粗蛋白质、粗脂肪和总氨基酸的表观消化率最高;棉籽粕的干物质和总能的表观消化率最低,米糠的粗脂肪和总磷的表观消化率最低。各饲料原料中总氨基酸表观消化率与粗蛋白质表观消化率的变化趋势一致,其中以蝇蛆粉最低。由此可见,大豆粕和玉米蛋白粉是青鱼的优质植物蛋白质源,可适量替代鱼粉;蝇蛆粉中粗蛋白质和氨基酸的消化率都较低,在青鱼饲料中的添加量不宜过高;花生粕、棉籽粕和菜籽粕也是较好的植物性蛋白质源,在青鱼饲料中适量添加既有利于饲料的营养平衡,还可降低饲料成本;米糠作为青鱼的能量原料必须保持新鲜,并控制其在饲料中的用量。     

功能性寡糖在水产动物饲料中的应用

人们通常把寡糖(Oligosaccharide)看成是抗营养因子.20世纪60年代,日本首先将其应用于食品,作为免疫增强剂,20世纪80年代又开发成饲料添加剂.寡糖作为一种功能性饲料添加剂,扩展了传统上糖类物质仅作为能源物质的功能,成为动物营养研究的新动向.迄今为止,已确认的寡糖大约超过1000种,作为饲料添加剂的是功能性寡糖.功能性寡糖在饲料工业上又称为化学益生素(即益生元,Prebiotics)、微生态促进剂.近年来,欧洲又将功能性寡糖与活菌制剂两者合用,称合生素(Synbiotics).目前,功能性寡糖在亚洲、欧洲等国家的生产和使用均呈上升趋势,我国农业部批准在饲料中作为添加剂使用的寡糖有甘露寡糖(MOS)、果寡糖(FOS)、低聚木糖(XOS)与糖萜素(SHP).功能性寡糖结构稳定,贮藏加工中不易失活,无毒、无害、元残留,能提高动物的抗病力和生产性能,是一种新型的绿色饲料添加剂.