瑞士乳酸杆菌HZ521株的分子鉴定及其部分生物学特性研究

根据GenBank中乳酸杆菌16 S～23 S rRNA基因间沉默区序列设计引物,进一步鏊定猪源乳酸杆菌分离株HZ521;并通过体外试验,以嗜酸乳酸杆菌ATCC 4356为参考菌株,探讨HZ521株的益生素作用.部分16 S～23 S rRNA基因序列同源性分析结果表明,该分离株属于瑞士乳酸杆菌.HZ521株具有较强的产酸能力,能耐受强酸,对Hela细胞的黏附率为87.2%,显著高于ATCC 4356株(P<0.01).表明瑞士乳酸杆菌HZ521株具有益生素特性,可作为肠道益生素的候选菌株.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR方法的建立

根据GenBank中的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(He-PRRSV)基因组序列设计1对特异性引物,建立一种基于SYBR Green I实时PCR检测HP-PRRSV的方法.结果表明,该方法能够检测到HP-RRSV的存在,不与其它猪源病毒发生非特异性反应,标准曲线线性范围为1011拷贝/反应～102拷贝/反应.与常规PCR方法相比,两者的符合率100%.该方法具有快速、简便、敏感等优点,具有重要的实用价值.     

猪链球菌2型溶血素基因缺失株构建及其生物学特性分析

猪链球菌溶血素(SLY)是较早确定的猪链球菌毒力因子之一,具有细胞毒性,在猪链球菌致病过程中发挥重要作用。利用同源重组技术成功构建了猪链球菌2型(SS2)sly基因缺失的突变株SS2-Δsly,缺失株的体外溶血活性消失,对小鼠脑血管内皮细胞的细胞毒性显著低于亲本菌株(P<0.01),但不影响猪链球菌2型在巨噬细胞中的存活。该菌株可以用于研究SS2溶血素在感染细胞中的作用机制。     

猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其分子流行病学

对已发表的戊型肝炎病毒(HEV)不同基因型毒株全序列进行分析,针对ORF3的保守区设计引物和探针优化建立了HEV荧光RT-PCR检测体系。分析表明该反应体系具有良好的扩增效率、特异性和稳定性,且检测灵敏度比普通RT-PCR方法高10～100倍。利用所建立的荧光定量PCR方法对采集自浙江及其周边上海、江苏等地区规模化猪场的样品以及HEV抗体阳性人血清样品进行了HEV核酸检测。其中,77份人血清样本仅有2份为HEV核酸阳性(2.6%)。而猪粪便样品阳性率则高达20.5%(56/273),且所调查的猪场均存在HEV感染。进一步的分子流行特征分析表明,浙江及周边地区的猪HEV毒株多为基因Ⅳ型,与其他地区的Ⅳ型HEV毒株同源性较高(83.4%～89.5%),但它们之间也存在较多的变异位点。猪源HEV毒株PJ-1则与多数Ⅲ型HEV毒株同源性较高(88%),进化分析也表明其为基因Ⅲ型。人血清样品中检测到的2份HEV毒株Human-1与Human-2与本地区Ⅳ型猪源毒株在分子进化关系上具有很高的亲源性,它们分布于同一分支内,而不构成独立分支。以上分析结果表明浙江及其周边地区猪HEV感染较为广泛,且以基因Ⅳ型毒株为主,但也存在...     

奶牛隐性乳房炎的病原学调查(简报)

奶牛乳房炎作为一种多因素性疾病,主要表现在致病菌的多样性,其中包括多种细菌以及真菌、病毒、霉形体等。为了摸清部分奶牛场乳房炎病原菌的区系分布及流行情况,我们于1981年至1988年间,对杭州及合肥市郊六个奶牛场956头奶牛的2300个隐性乳房炎乳区的奶样,进行了细菌的分离鉴定。     

两种抗菌素油剂防治奶牛干奶期乳房炎的疗效比较

以杭州乳房炎诊断法(HMT)、细菌学检验和临床检查结果为依据,综合判断PC-805和TA-125两种抗菌素油剂对干奶期乳房炎的防治效果。66头受试奶牛随机分成两组,第一组35头136个乳区于停奶当天经由乳头管注入20ml PC-805;第二组31头121个乳区以同样方法注入20ml TA-125。第一组牛在干奶前有72个乳区为HMT强阳性(++、+++),至产后降为11个,转阴率为84.7％;第二组牛在干奶前HMT强阳性乳区为66个,产后降至6个,转阴率为90.9％。第一、二组HMT强阳性乳区的细菌转阴率分别为57.4％和68.4％,除去新感染后则分别为70.5％和75.4％。这两种制剂对链球菌感染的效果较好,而对葡萄球菌的作用较差,第一组牛在千奶期间的临床发病率为2.9％,第二组为1.7％。尽管TA-125的疗效较好,但统计结果表明这两种制剂对HMT和细菌转阴率以及临床发病率方面均无显著差异(P>0.05)。     

牛奶中大肠杆菌(Escherichia coli)生长的荧光测定法

大肠杆菌(Escherichia coli)产生的β-葡糖苷酸酶可以分解4-甲基伞形酮酰β-D-葡糖醛酸苷(4-MUG),形成产生荧光的终产物:4-甲基伞形酮,本试验将4-MUG加入牛奶中并应用荧光扫描仪检测酶解终产物的荧光强度以判断大肠杆菌在牛奶中的生长状况.试验结果表明,荧光强度自第4小时起开始上升,滞后于活菌数的增加,但荧光度增强与活菌数增加具有较好的一致性,而且方法快速,简便,应用荧光分析法初步证明乳酸菌对大肠杆菌的生长未见有抑制作用.     

集约化猪场PWD病原性大肠杆菌毒力因子分析

探索浙江省集约化猪场仔猪断奶腹泻(PWD)病原性大肠杆菌血清型和毒力因子特征,为PWD防治及耐药性研究提供资料.从10个规模化猪场以直肠棉拭子采集PWD病料,经细菌分离纯化、革兰氏染色、生化试验和小鼠致病性试验等,对病原进行鉴定.采用11种猪源大肠埃希氏茵常见O型抗原血清、应用K88及F18菌毛单因子血清对分离茵进行玻板凝集试验和PCR方法分析黏附素及肠毒素类型.分离鉴定的56株病原性大肠杆菌O抗原定型了33株,共覆盖了11种血清型,其中O149、O139、O8为优势血清型,共17株,占定型菌株的51.5%;茵毛单因子血清玻板凝集试验和PCR测得病原性大肠杆菌中产肠毒素大肠杆菌(ETEC)比例较高,占病原性大肠杆菌分离总数的67.92%(36/53),肠毒素中含STa、STb、STa+STb、LT和SL-2e分别占总检测菌株数的30.19%(16/53)、35.85%(19/53)、18.9%(10/53)、1.89%(1/53)和9.43%(5/53).黏附素类型主要有K88和F18两种,分别占总检测菌株数的24.53%(13/53)和28.30%(15/53).结果表明,浙江省PWD病原性大肠杆菌至少覆盖了包括优势血清型O149、O139、O8在内的11种血清型;大肠杆菌中以产肠毒素型为主,主要毒力因子包括黏附素F18及K88和肠毒素STa、STb、SLT-2e等.     

基因疫苗在畜禽传染病中的应用及前景

介绍了基因疫苗的免疫学特性、增强免疫效力策略以及在畜禽传染病领域中应用的最新动态，展望了其广阔的应用前景，并提出了基因疫苗在应用过程中产生的一系列有待于进一步解决的问题，从而为畜禽传染病的防制提供了新思路和新途径。     

减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗诱导对新城疫病毒的免疫保护

探讨了以减毒鼠伤寒沙门氏茵为栽体传递新城疫病毒DNA疫苗的安全性、免疫原性和可行性。将含新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pcDNA3-F的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株(ZJ111／pcD-NA3一F菌株)，以10^8CFU进行首免，2周后二免，三免后4周攻击强毒株F48E9，观察其安全性和免疫原性，同时设只含空载体pcDNA3的ZJ111／pcDNA3菌株对照及口服PBS对照。结果表明：重组ZJ111／pcDNA3-F菌株具有良好的安全性。对强毒株攻击的保护率达64．7％。重组ZJ111／pcDNA3-F菌株不仅能诱导雏鸡产生NDVELISA抗体，而且诱导产生的法氏囊B淋巴细胞和胸腺T淋巴细胞增殖反应显著高于ZJ111／pcDNA3时照组。这些结果提示，减毒沙门氏菌为载体不仅可直接将NDVF基因呈递给鸡体细胞进行表达，产生抗NDV的体液免疫，而且还可诱导细胞免疫应答。