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应用环介导等温扩增技术建立一种快速灵敏的转基因番木瓜GM YK品系检测方法。针对转基因番木瓜GM YK品系外源基因与内源基因结合处序列设计1组特异性引物,利用SYBR Green荧光PCR仪实时监测扩增过程,对反应体系进行优化。用优化后的反应体系检测LAMP方法的灵敏性、特异性,并对市售番木瓜进行检测。LAMP检测方法反应速度快,在60 min内即可完成扩增,检测结果易于观察,通过肉眼观察染色情况即可分辨,该方法灵敏度高,检测限可达到5.78 pg,并且具有良好的特异性。LAMP检测方法可快速、灵敏、特异的检测转基因番木瓜GM YK品系,并适用于基层和现场检测。 相似文献
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口服嗜水气单胞菌生物被膜疫苗的动物免疫试验 总被引:8,自引:2,他引:8
将热灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)生物被膜(biofilm,BF)菌苗和浮游(freecell,FC)菌苗口服免疫小鼠和剑尾鱼,通过测定抗体效价、相对保护率、小鼠的淋巴细胞转化和肠道sIgA浓度,评价免疫效果。免疫20d后,BF菌苗组50尾剑尾鱼的相对保护率为68%;FC菌苗组为42%。BF菌苗组12只小鼠的相对保护率为70%;FC菌苗组为50%;对照组为17%。BF菌苗组小鼠外周血淋巴细胞转化率是7.28、FC菌苗组为3.87、对照组为2.36。BF菌苗组小鼠肠道sIgA浓度是1.22μg/mL;FC菌苗组为0.73μg/mL;对照组为0.465μg/mL。免疫30d后,小鼠的血清凝集抗体达到最高,BF组抗体达128:1,FC组为32:1,对照组为2:1。各组间差异显著(P<0.01)。结果表明,BF菌苗较FC菌苗能更有效地刺激机体的免疫系统,尤其是肠道淋巴组织的免疫应答,对剑尾鱼和小鼠具有较好的保护力。 相似文献
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采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP),建立了草莓潜隐环斑病毒(Strawberry latent ringspot virus, SLRSV)检测方法。根据SLRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过逆转录环介导等温扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明,引物对SLRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP的灵敏度比普通RT-PCR高出100倍。该方法无需特殊的试剂和设备,只需在水浴锅中65 ℃等温扩增,整个检测周期约1.5 h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。 相似文献
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南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒的研制 总被引:2,自引:2,他引:0
南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)是我国对外公布的检疫性有害生物,其寄主广泛,极易传播、蔓延[1],因此,加强对该病毒的检测具有重要的意义.目前,针对ArMV的检测方法主要有DAS-ELISA和RT-PCR技术[2].这两种方法在检测周期方面具有明显的优势,且操作简单,但对仪器的依赖性较强.环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新颖的核酸扩增方法,具有检测速度快、周期短、操作简单和灵敏度高等优点,同时LAMP无需特殊的仪器.本试验对ArMV的LAMP检测试剂盒进行了研制. 相似文献
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佐剂对嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫效果的作用 总被引:6,自引:1,他引:6
制备嗜水气单胞菌J—1株福尔马林灭活疫苗,用浸浴法免疫银鲫。设疫苗加IMS1312佐剂免疫组、不加佐剂疫苗免疫组及未免疫对照组,每组20尾。18~20℃水温饲养35d,检测银鲫血清嗜水气单胞菌凝集抗体。佐剂组抗体效价达1:64,相对保护率为67%。不加佐剂免疫组抗体效价为1:32,相对保护率达56%。对照组抗体效价为1:4,相对保护率为10%。试验结果表明浸浴免疫对银鲫具有较好的保护力,佐剂IMS1312可增强鱼体的免疫应答。 相似文献