壳寡糖对凡纳滨对虾生长和免疫力的影响

为研究壳寡糖（ch itooligosaccharides,COS）对凡纳滨对虾（Litopemaeus vannam ei）生长和非特异性免疫水平的影响,设置了含COS分别为0（对照）、250 mg.kg-1、500 mg.kg-1、750 mg.kg-1和1 000 mg.kg-1的5组试验饲料,进行了4周的饲养试验。结果显示,COS添加量为250 mg.kg-1和500 mg.kg-1时凡纳滨对虾血细胞总数、生长率和成活率显著提高（P〈0.05）,含COS 250 mg.kg-1时对虾血清中的过氧化物酶（peroxidase,POD）活力显著提高（P〈0.05）,添加量为500 mg.kg-1时酸性磷酸酶（ac id phosphatase,ACP）和溶菌酶（lysozym e,LSZ）活力显著提高（P〈0.05）,添加量为250 mg.kg-1和500 mg.kg-1时总超氧化物歧化酶（total superoxide d ismutase,T-SOD）活力提高不显著（P〉0.05）。由此表明饲料中添加250～500 mg.kg-1COS可使凡纳滨对虾细胞免疫和体液免疫因子总体活力达到较高水平,可显著提高凡纳滨对虾的生长率和成活率。     

厚壳贻贝不同组织中的微生物群落结构

为了解厚壳贻贝（Mytilus coruscus）各组织中微生物的分布差异,本实验在Illumina MiSeq 测序平台利用16S rDNA克隆子测序（V3-V4区）对嵊泗养殖贻贝的血淋巴、消化腺、肾脏、鳃、外套膜、性腺和足等7种组织中的微生物群落结构进行分析,并比较组织间微生物的多样性差异。结果显示,21个样本平均产生36,860条高质量序列。血淋巴共有1,237个OTU,其次是消化腺（1,014个OTU）和肾脏（1,015个OTU）,性腺最少（仅有553个OTU）。尽管血淋巴OTU数最高,但仅有9个独有OTU。肾脏拥有最多172个独有OTU,消化腺次之（144个独有OTU）。所有组织中均以变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）和疣微菌门（Verrucomicrobia）为主要菌群。Alpha多样性指数分析显示血淋巴、消化腺和肾脏微生物多样性最高。以上结果表明,厚壳贻贝微生物存在一定的组织差异性,这将为今后深入阐释厚壳贻贝与微生物之间的相互作用及其调控机理奠定基础。     

1株海洋产电细菌的筛选鉴定及产电条件的优化

为筛选到产电海洋细菌,从浙江省舟山海域潮间带中得到1株产电细菌m2。16S rRNA分子鉴定和系统发育树显示,该菌株与Shewanella sp. R 52675和Shewanella marisflavi SW 117进化关系最近,初步鉴定为Shewanella属细菌,并命名为Shewanella sp.m2。在单因素试验的基础上,应用Plackett Burman试验设计和响应面分析方法（RSA）对该菌株的培养条件进行系统优化,得到最终优化结果为培养温度506 ℃、培养时间1475 d、盐度1035%、初始pH值75、接种量1%、微量元素15 mL·L-1、硫酸镁003%、氯化钾01%,在此条件下最终输出电压为115 mV,比优化前的输出电压提高了533%。     

浒苔中MnSOD和CAT基因克隆和表达分析

实验以大型绿藻浒苔为材料,克隆了其抗氧化系统关键酶锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)基因的部分片段,利用荧光定量PCR技术研究了Mn SOD和CAT对温度和水杨酸作用的响应规律。结果获得浒苔318 bp的Mn SOD基因,该Mn SOD推测的氨基酸序列与裂片石莼Mn SOD相似性最高为89%;获得了229 bp的CAT基因,该浒苔CAT编码氨基酸序列与裂片石莼和雨生红球藻CAT序列相似性分别为99%和93%。在利用M n SOD和CAT氨基酸序列构建的系统树中,浒苔均先与裂片石莼聚类,再与其他绿藻聚在一起。不同温度对浒苔Mn SOD和CAT基因表达影响表明,35℃高温培养对浒苔Mn SOD和CAT基因表达影响最显著,其表达量分别为25℃培养的2.18倍和2.05倍;5℃低温培养次之;而15℃与25℃培养对M n SOD和CAT基因表达影响差异不显著(P0.05)。在高温35℃下,添加0.1 mmol/L水杨酸后Mn SOD和CAT基因表达量分别为各自对照的2.08倍和5.30倍,而0.01 mmol/L水杨酸添加后基因表达与对照差异不显著(P0.05)。研究表明,Mn SOD和CAT基因表达的增强不仅是浒苔对高温胁迫的响应,而且也是水杨酸缓解高温对浒苔不利影响的方式之一。     

浅议贷后管理工作中存在的问题及建议

一、贷后管理中存在的主要问题 （一）对贷后管理认识不到位 目前,观念上的重贷轻管是造成贷后管理薄弱的主观因素。商业银行的综合收益大都是通过授信拉动的,商业银行加大贷款投放,拓展新的贷款客户,能够为银行带来显著的当期收益。但是,贷款发放后,银行失去了对贷款资金的控制权,监管难度大,耗费精力多。贷后管理成了事后管理、被动管理。     

舟山黄海葵杀虫活性多肽的初步研究

通过多维高效液相色谱结合动物实验,从舟山黄海葵粗毒中筛选了多种具有强杀虫活性以及低哺乳动物活性的杀虫肽,其分子量约在2~5 kDa之间,在100μg/kg体重浓度下对脊尾白虾以及黄粉虫幼虫具有强且快速的麻痹、致死活性,对小鼠毒性较弱。上述研究结果表明舟山黄海葵是一个研究和开发杀虫肽的宝库,同时也为从舟山黄海葵毒素中进一步筛选杀虫肽并深入研究其杀虫机理奠定了基础。     

探究式教学法在遗传学实验教学中的应用

探究式实验教学是一种培养创新性人才的新方法。遗传学实验中运用探究式教学方法,可以提高学生学习的主动性,培养学生的开拓创新、团队合作精神,使教学改革取得良好效果。     

厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin真核表达载体构建及表达的初步分析

[目的]研究厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin真核表达载体构建及表达。[方法]通过对前期所获得的厚壳贻贝多条mytilin和myticin抗菌肽基因进行筛选,选择其中5条厚壳贻贝抗菌肽基因,采用PCR技术和DNA重组技术构建了相关的真核表达载体,并采用LiAC转化法将其转化到S78酿酒酵母中并进行初步表达分析。[结果]5种厚壳贻贝抗菌肽基因的真核表达载体构建成功,对转化酵母进行mRNA检测结果表明,5种厚壳贻贝抗菌肽的基因在S78酵母中成功转录。[结论]该研究结果为最终采取基因工程手段表达厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin并在此基础上开展厚壳贻贝抗菌肽的后续研究奠定基础。     

壳寡糖对三疣梭子蟹免疫力的影响

为研究壳寡糖对三疣梭子蟹免疫功能的影响,设置了含壳寡糖0.0、0.5、1.0、1.5和2.0 g/kg（分别为T0、T1、T2、T3和T4组）的5组试验饲料饲喂三疣梭子蟹,分别在第10 d、20 d和30 d取血清进行酚氧化酶（PO）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、溶菌酶（LSZ）和过氧化物酶（POD）活性的测定,试验结束时测定血细胞的密度。结果显示,在基础饲料中添加适量的壳寡糖可以显著性提高ACP、T-SOD、LSZ、POD活力（P〈0.05）,对PO和AKP活力促进效果不显著（P〉0.05）。壳寡糖可以显著提高三疣梭子蟹血细胞密度（P〈0.05）,对3种血细胞所占比例有一定的影响（P〉0.05）。综合考虑,T2、T3组对三疣梭子蟹免疫促进效果较好,建议基础饲料中壳寡糖添加量为1.0～1.5 g/kg。     

三疣梭子蟹免疫相关基因Cystatin的鉴定与表达分析

半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin超家族在机体中参与包括免疫调节在内的多种生理病理功能。通过对三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）血细胞全长cDNA文库随机测序,鉴定了一个新颖的I型Cystatin基因,命名为PtCystatin。PtCystatin全长cDNA 960 bp,开放阅读框372 bp,编码123个氨基酸残基,N端19个氨基酸残基为信号肽。PtCystatin成熟肽有104个氨基酸残基,理论分子量为11 64030 Da,等电点pI为524,有一个Cystatin结构域。PtCystatin与I型Cystatin序列同源性高,人Cystatin A与靶酶结合的2个基序在PtCystatin中也保守（M26VPGG30,Q71VVAG75）,C端无二硫键。组织表达差异分析显示PtCystatin在胃中表达量高,其次为肝胰脏、鳃、血细胞,肌肉和眼中表达量低。致病菌副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）诱导3 h,血细胞PtCystatin表达量小幅上调121倍（P＜005）;而在6 h和12 h显著下调,分别为047倍（P<001）和057倍（P<005）;24 h恢复到诱导前水平,提示PtCystatin可能参与三疣梭子蟹的免疫防御反应,是一个免疫相关基因。