2017年中国部分地区白斑综合征病毒高变异区的序列分析

白斑综合征病毒(WSSV)自暴发以来给全球范围内的对虾养殖产业带来了巨大的损失。为了解我国凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖区WSSV的流行变异情况,选取2017年中国部分地区的42个WSSV阳性样本,对ORF14/15、ORF23/24、ORF75、ORF94和ORF125共5个可变区进行PCR特异性扩增,分析其序列的缺失变异和重复单元(Ru)中单核苷酸多态性的变化。研究结果显示,在ORF14/15的扩增中共出现4种缺失片段; ORF23/24只出现11 945 bp的缺失片段; ORF75扩增中,总RUs数目为3、4、9,其中45 bp的RUs在12、27、80位点发生多核苷酸多态性; ORF94的RUs数目为6,其各重复单元在48位发生单核苷酸多态性; ORF125的RUs数目为4、6、7不等,其各重复单元分别在20、27、50、53、61位发生碱基突变。研究结果表明,2017年样本中,WSSV在中国大部分地区均出现一定程度的缺失变异,其中部分可变区表现出缺失情况的稳定性,某些可变区的重复单元数目及SNP表现出地区的差异性以及不稳定性。     

白斑综合征病毒2014年中国毒株变异区的序列比较

为研究白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)在中国不同地区的分子流行病学变异特征,对2014年1-8月期间在病害暴发区采集到的48份PCR检测阳性样本,用ORF75、ORF94和ORF125引物扩增目的片段,连接转化已克隆目的片段,测序分析不同样本ORF75、ORF94和ORF125重复序列数目的差异.结果显示,不同地区毒株ORF75的重复单元数目有4、10、11、12、13不等,ORF94的重复单元数目有4和14,而ORF125的重复单元数目有0、3、5、6、7不等.结果表明,流行在中国大部分地区的WSSV存在一定程度变异,毒株间的变异在ORF75、ORF94和ORF125上比较明显.     

养殖水体中添加蜡样芽孢杆菌PC465 对凡纳滨对虾抗病力的影响

将蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)PC465添加到凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖水体中至终浓度分别为10~4、10~5和10~6 CFU/mL,以无益生菌添加的养殖组为对照组,定期检测实验对虾肠道和养殖水体中的细菌总数、弧菌总数以及水体中氨氮含量和亚硝酸氮含量。实验结果表明,水体中添加益生菌能降低凡纳滨对虾肠道内细菌数量,且与对照组相比差异显著(P0.05);高浓度的益生菌处理组可以明显降低养殖水体内弧菌数量(P0.05),但是益生菌并没有显著影响水体中的氨氮含量和亚硝酸氮含量。养殖4周后进行WSSV投喂感染实验,感染实验表明,实验组H组(益生菌浓度为10~6 CFU/mL)和M组(益生菌浓度为10~5 CFU/mL)凡纳滨对虾的累计死亡率分别为63.9%和74.6%,显著低于对照组100%的累计死亡率(P0.05)。感染实验期间采用荧光定量PCR方法测定了凡纳滨对虾3种免疫相关基因的表达情况,统计数据显示,益生菌处理组的脂多糖-β-1,3-葡聚糖结合蛋白(lipopolysaccharide-β-1,3-glucan-binding protein,LGBP)、β-1,3-葡聚糖结合蛋白-脂蛋白(beta-1,3-glucan-binding protein-lipoprotein,βGBP-HDL)、热激蛋白70(heat shock proteins,Hsp70)mRNA的表达量在WSSV感染后呈显著上调趋势。实验结果提示,水体中添加蜡样芽孢杆菌PC465可以提高凡纳滨对虾抗WSSV感染能力,其作用机制可能是降低对虾肠道和水体中的细菌和弧菌数量,或调节免疫相关基因的表达水平。     

温和型猪瘟与血液原虫病混合感染的诊治

1 发病情况 唐山市丰润区欢喜庄乡某猪场,共有存栏母猪97头、20～30 kg育肥猪310头,按常规免疫.2009年12月份母猪突然出现流产、死胎现象,有几头猪咳嗽、流鼻涕,按感冒治疗3 d,症状有所减轻,但未消除,畜主就停止了用药,而后疾病在猪群中逐渐扩散,到最后育肥猪、后备母猪都有类似症状出现.     

2014年中国不同地区对虾白斑综合征病毒ORF14/15和ORF23/24缺失区序列比较

对虾养殖面临诸多病害威胁，对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus, WSSV)是养殖对虾主要病原之一，WSSV不同地理株的变异可能导致WSSV毒力的变化。为了解2014年中国大部分地区WSSV ORF14/15和ORF23/24的变异情况，本研究选择2014年1月–8月期间采集的48份WSSV阳性样本，用特异引物扩增ORF14/15和ORF23/24片段，连接于T载体，转化至Top10中，筛选阳性克隆，测序分析不同样本之间的缺失差异。结果显示，能够扩增ORF14/15和ORF23/24样品的比例分别为43.75%和33.33%。在ORF14/15扩增中，分别扩增出1260 bp、1270 bp、1892 bp和2662 bp片段，与TH-96-Ⅱ比对共有4种缺失情况，即缺失6540 bp、6530 bp、5908 bp和5138 bp。而在ORF23/24扩增中，分别扩增出1140 bp和1146 bp片段，与中国台湾株(TW)比对有两种缺失情况，即缺失12070 bp和12064 bp。研究结果表明，WSSV在中国大部分地区存在一定程度的变异，而不同毒株之间在ORF14/15可变区差异比较明显，在ORF23/24可变区差异不大，但均具有大片段缺失。     

2013年中国典型对虾养殖区白斑综合征病毒流行株高变异区序列的分析比较

为了解中国不同地区白斑综合征病毒的流行变异情况,本研究取用2013年3—12月从7个省市发病地区采集到的64份WSSV阳性样本,以特异的引物扩增目的片段,通过测序分析不同样本的缺失及变异差异。结果显示,在开放阅读框ORF14/15的扩增中,分别有6530 bp、6533 bp和5138 bp的片段缺失,而在ORF23/24扩增中有12070bp大片段的缺失,不同地区样本中未能成功扩增ORF75,而ORF94的重复单元数目分别为0、3、4、12不等,ORF125的重复单元数目为0、7。SNP分析表明,含有3个重复单元的ORF94在48位的碱基为T、T、T,重复单元数为4的在48位的碱基为T、T、T、T,重复单元数为12的在48位的碱基分别为T及11个A。而ORF125所有重复单元数为7的情况在8、18、25、66、69位置的碱基均为G、G、G、G、A,在9、50、53、61位的碱基也普遍出现了变异。结果表明,WSSV在中国不同地区存在一定程度的变异,其在序列中的缺失、重复单元数目以及SNP的差异较为明显。     

2015年中国典型对虾养殖区WSSV流行株高变异区序列的分析比较

为了解我国白斑综合征病毒(WSSV)流行变异特征，本研究对2015年4~10月期间在山东、江苏、天津、浙江、海南和广东6省市采集到的57份WSSV阳性的样本，通过特异性的扩增目的片段，根据测序结果分析比较不同地区、不同分离株之间在ORF14/15、ORF23/24上的缺失变异情况，以及ORF75、ORF94和ORF125上的重复单元(Repeat unit, RU)数目差异。结果显示，在ORF14/15扩增中，分别有6530、5908和5725 bp的片段缺失，而在ORF23/24扩增中均有12070 bp大片段的缺失，ORF75的45 bp的RU数目分别为1、2和3，102 bp的RU数目均为1，而ORF94的RU数目分别为4、5、10和12不等，ORF125的RU数目为3、5和6。结果表明，WSSV在部分开放型阅读框上表现出明显的变异差异，而在某些开放型阅读框上的缺失情况则有显著的稳定性。     

一例猪圆环病毒病与猪蓝耳病混合感染的诊治

正猪圆环病毒感染主要侵害怀孕母猪、保育仔猪和育肥猪。引起的疾病包括母猪繁殖障碍、仔猪先天性震颤、仔猪断奶后多系统衰竭综合征、增生性坏死性肺炎、猪皮炎肾病综合征、猪呼吸系统综合征等。同时感染产生的免疫抑制导致机体免疫力下降,极易引发其他病原混合感染或继发感染。在临床上猪圆环病毒病最易与猪蓝耳病协同感染,致病力明显增强,死亡率增高,增加临床控制难度。曾处理一起典型的猪圆环病毒病和猪蓝耳病混合感染的案例,分     

BMPR-IB、BMP15、ESR、GDF9与ADAMTS1基因多态性与杜泊羊繁殖性状的关联性分析

为揭示绵羊繁殖力的影响机制,利用分子标记辅助选择来快速提高绵羊的繁殖性能,本实验采用直接测序法对杜泊羊与湖羊群体5个基因中的突变位点进行了比较分析。结合测序后序列通过DNAStar软件预测蛋白质二级结构;统计基因型频率、基因频率、纯合度、杂合度和多态信息含量并将基因多态性与产羔数进行关联分析。结果表明:杜泊羊ESR2基因中的RS428438934位点处发生T→C突变,导致氨基酸发生了改变,CC与CT、TT与CT基因型之间产羔数差异显著;RS418841713在杜泊羊与湖羊中都具有多态性,处于不平衡状态;RS398521635、RS402413016、G7、G8、RS417060437、RS604746425在杜泊羊与湖羊中均只有1种基因型,无突变类型,处于Hardy-Weinberg平衡状态。