凡纳滨对虾原肌球蛋白基因表达模式与重组表达

根据相近物种的同类基因设计引物，从凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肌肉组织中克隆获得原肌球蛋白基因（TPMS），长度为901bp，其中包含长度为852bp的完整开放阅读框，编码原肌球蛋白分子量为32．8kDa；RT—PCR结果显示，原肌球蛋白在心、肝胰腺、胃、鳃、肠和肌肉组织中均有表达，在肌肉中表达量最高，在鳃中表达量最低；将原肌球蛋白基因构建原核重组表达载体TPMS—pET30a，转化受体菌株BL21（DE3）并利用IPTG诱导后能够大量表达，蛋白分子量为38．2kDa；经优化，IPTG的最适诱导浓度为0．05mmol／L，最适诱导时间为4h；经过亲和纯化后，能够得到纯度90％以上的重组表达蛋白。