用磁珠富集法快速制备银鲫微卫星标记

将磁珠富集法和用γ-32P标记的放射性探针法相结合,快速制备银鲫Carassius auratus gibelio微卫星。用限制性内切酶MboI对银鲫完整基因组DNA酶切,用不同蔗糖浓度梯度离心收集400~900 bp大小的片段,连接Brown接头,构建银鲫全基因组文库。用生物素标记的(CA)16寡核苷酸探针进行筛选,磁珠富集含有微卫星的DNA单链序列;对DNA模板进行PCR扩增,连接pMD18-T载体,转入用CaCl2制备的感受态大肠杆菌Escherichia coliDH5α中,得到微卫星序列文库;经用同位素γ-32P标记的探针(CA)16二次筛选,获得235个阳性克隆,对其测序,得224个含微卫星序列,完美型、非完美型、复合型序列分别占总数的52.8%、28.7%、18.5%。除探针中使用的(CA/GT)n重复单元外,还观察到(GA/CT)n、(ACTC)4的重复序列。设计163对引物,选择合成30对引物,经聚丙烯酰胺凝胶筛选,9对可以获得清晰条带,其中3对为单态,6对为多态。     

长江、珠江、黑龙江水系野生鲢遗传多样性的微卫星分析

采用34个微卫星分子标记，对长江（湘江、监利、枞阳）、珠江、黑龙江（抚远）鲢共5个群体的观测杂合度(H_o)、期望杂合度(H_e )、多态信息含量(PIC)和有效等位基因数(N_e)等进行了遗传检测，根据基因频率计算遗传相似系数和Nei氏标准遗传距离，以卡方检验估计Hardy-Weinberg平衡，以近交系数(F_ST)和基因流(Nm)分析群体的遗传分化。同时，基于Nei氏标准遗传距离获得NJ聚类图。共检测出154个等位基因，其中有80个共有基因。位点等位基因1～9个不等，平均等位基因4.666 7，平均有效等位基因2.948 9。5群体平均观测杂合度为0.329 5～0.461 9，平均期望杂合度为0.500 2～0.552 9，平均多态信息含量为0.443 5～0.493 0。表明5群体为中度多态，遗传多样性较低，且长江不同地理群体的遗传多样性也有差异，但差异不显著。通过群体间遗传相似性和遗传距离比较显示：长江3个群体间遗传相似系数最大，遗传距离最小；黑龙江与长江鲢群体间相似系数较大（平均0.871 8），遗传距离较小（平均0.137 4）表明二者遗传分化亦最小；珠江鲢与长江鲢间的相似系数最小（平均0.831 0），遗传距离最大（平均0.185 2），其遗传分化差异较大，结果未显现出群体间遗传差异的大小与其地理距离远近呈正相关。