凡纳滨对虾精氨酸激酶的分离纯化及性质研究

经过CM-纤维素批量层析、Separdex G-100柱层析、DEAE_纤维素柱层析等步骤,从凡纳滨对虾肌肉组织分离得到精氨酸激酶,经SDS-PAGE检测达到电泳纯,分子量约为40kDa.对该酶的性质进行分析结果表明,精氨酸激酶的最适作用温度为55℃,当温度高于65℃时,酶活力显著下降;pH 8时酶活力较高,低浓度的精氨酸对酶活力有促进作用,高浓度时表现抑制作用,而底物类似物精胺和氨基胍则对酶促反应表现出完全的抑制.NaCl,KCl对酶的活力具有促进作用,低浓度(10 mmol·L-1)MgCl2对酶活力表现出激活作用,而CuCl2与MnCl2则表现出完全抑制酶活力,CaCl2与ZnCl2在低浓度时对酶活力无明显影响,但是随着浓度升高,对酶具有抑制作用.     

大黄鱼肿瘤抑制因子cylindromatosis (LcCYLD)的序列与免疫反应特征及其功能

为研究大黄鱼肿瘤抑制因子cylindromatosis（CYLD）在免疫反应中的作用,本实验克隆了大黄鱼CYLD的全长cDNA（命名为LcCYLD）并对其进行序列分析;采用荧光定量PCR的方法对大黄鱼各组织及免疫刺激后的大黄鱼肾细胞系中的LcCY LD表达变化进行检测;构建了重组表达载体pTurboGFP-CYLD及pcDNA3.1-CYLD,分别用于亚细胞定位实验及过表达实验;在HEK293T细胞系中过表达LcCYLD后采用双荧光素酶报告系统检测了 NF-κB、TNF-α及IL-1β 启动子活性的变化。结果显示,LcCYLD的ORF包含2 754 bp,编码917个氨基酸,推测具有保守的3个N端的CAP-GLY结构域,1个磷酸化区域和1个C端的UCH结构域,多序列比对结果显示各物种CYLD间高度保守;系统进化分析显示,LcCYLD与来源于其他硬骨鱼的CYLD聚为一支,其中与条纹鲈的CYLD关系最近;转录水平表达分析发现LcCYLD在大黄鱼各组织均有表达,其中在脑中表达量最高;LPS及poly I:C刺激能够显著诱导LcCYLD的表达;亚细胞定位实验表明LcCYLD在细胞质及细胞核中均有表达;过表达LcCYLD能够显著抑制NF-κB及促炎细胞因子TNF-α及IL-1β的转录激活。以上研究结果表明大黄鱼CYLD能够抑制NF-κB的转录激活,为深入了解LcCYLD在大黄鱼先天免疫信号转导中的作用奠定基础。     

外源水杨酸对镉胁迫下月季叶片超弱发光的影响

通过对月季叶片超弱发光强度及SOD活性和MDA含量测定,结果表明:当外源水杨酸浓度达到50 mg·L-1时,SA可以缓解镉对月季叶片的胁迫作用,降低活性氧的含量,并减弱月季叶片延迟发光的强度,同时也表明植物体内活性氧的含量改变与植物延迟发光的衰减趋势有着直接的联系.     

镧对镉胁迫下月季叶片超弱发光的影响

[目的]研究镧对镉胁迫下月季叶片的缓解作用及对其超弱发光的影响。[方法]同时用50 mg/L镉和不同浓度的镧(40、60、80mg/L)处理月季叶片,测定叶片的自发光和延迟发光的强度及SOD活性和MDA含量。[结果]月季叶片经24 h培养后,各处理与空白对照相比,自发光变化趋势无明显规律。镉对月季叶片产生了胁迫,一定浓度的镧具有缓解镉胁迫的作用,60 mg/L的镧作用最为显著。镉胁迫促使月季叶片SOD活力显著降低,用镧处理后SOD活力没有显著差异。镉促进月季叶片中MDA含量的增加,随着镧浓度的升高MDA含量趋于正常。[结论]在镉的胁迫下月季叶片的延迟发光强度增加、SOD活力降低、MDA含量上升,镧处理后其延迟发光强度明显降低、MDA含量趋于正常,但SOD活力变化不显著。     

大黄鱼同质雌核发育的诱导及微卫星标记分析

为了解大黄鱼同质雌核发育的诱导条件及其效果，用紫外线照射灭活大黄鱼精子的遗传物质，静水压休克抑制第一次卵裂，培育出2个同质雌核发育家系(GF1和GF2)，并借助微卫星标记进行鉴定，研究了10个母本中杂合的位点在2个家系中的传递和分离。结果显示，GF1和GF2孵出的仔鱼中分别有40.0%和17.1%形态正常个体，GF1检测8个位点30个个体均表现出雌核发育双单倍体（GDH）的特征，有20种基因型；GF2检测4个位点30个个体中，27个为GDH，2个含有父本基因，余下1个个体扩增条带既不同于母本也不同于父本，遗传本质不明。可见，所采用方法可以诱导出同质雌核发育大黄鱼。10个标记中除了LYC0026和LYC0053标记在GF2中偏离了1∶1（P<0.05），其余标记在GDH中的分离均符合孟德尔遗传定律的预期比值。研究还发现LYC0002和LYC0014的分离模式完全相同。首次报道了大黄鱼同质雌核发育的人工诱导及微卫星标记在GDH中的传递与分离，为大黄鱼纯系培育及利用GDH与纯系进行基因组作图分析等研究奠定了基础。     

凡纳滨对虾精氨酸激酶的多克隆抗体制备及组织特异性表达分析

精氨酸激酶（arginine kinase，AK）在调节无脊椎动物磷酸精氨酸与ATP之间能量平衡的过程中具有重要作用。在前期工作基础上，设计特异引物，以凡纳滨对虾肌肉组织cDNA为模版，克隆得到了1 071 bp的凡纳滨对虾精氨酸激酶的完整开放阅读框；将它克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上，转化BL21 (DE3) 菌株，经诱导后表达出GST-AK融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠，制备多克隆抗血清，经检测该抗原与抗体识别良好。利用得到的抗体对凡纳滨对虾AK在蛋白质水平上的特异性表达进行分析发现，精氨酸激酶在对虾的肌肉、心脏、神经、血细胞和胃组织中具有高的表达量，而在眼柄、肝胰腺、鳃和皮肤组织中表达量较低。为进一步研究精氨酸激酶在对虾体内的功能奠定了基础。     

温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺氧代谢及能量代谢的影响

为探究温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺氧代谢和能量代谢的影响,本研究采用生物化学方法分析了低温及高温胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺中超氧阴离子(O2-·)产生,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及谷胱甘肽(GSH)含量,一氧化氮合酶(NOS)活力及其催化的一氧化氮(NO)生成量,以及对三磷酸腺苷(ATP)含量的影响.结果表明,15℃低温及31与35℃的高温胁迫均会导致O2-·显著增加,在15 ～31℃内,SOD活力与O2-·含量变化趋势相似,低温胁迫导致CAT活力升高更为显著,低温与高温胁迫后,GSH含量均显著增加;高温胁迫会引起NOS活力及其催化的NO生成量显著增加;低温与高温胁迫均会引起ATP含量显著增加,但是随着温度回复至对照水平,ATP含量也回复至对照水平.结论:低温和高温胁迫均会引起凡纳滨对虾肝胰腺组织中氧代谢失衡,SOD、CAT及GSH在机体应对低温及高温胁迫导致的氧化损伤中可能扮演不同角色,NO介导的信号传导可能在应对高温胁迫中起着重要作用;低温及高温均会导致ATP含量增加,提示对虾在应对温度胁迫的过程中可能需要更多能量.推测环境温度过低或者过高时,可能由于超出凡纳滨对虾氧-温度忍受极限(OCLTT)而导致氧代谢失衡,并对凡纳滨对虾的能量代谢及其他生理活动产生重要影响.     

海带多糖的抗衰老作用及其机理的研究

以果蝇(Drosophila melanogaster)作为试验动物,探讨了海带多糖(Laminaria japonicapolysaccharide,LJP)延缓衰老的作用及其机理。试验将未交配的果蝇雌雄分开并随机分成4组,每组100只,用含不同浓度海带多糖的培养基喂养,培养基中所含海带多糖的浓度分别为0(对照组)、0.25%、0.50%、1.00%。用果蝇寿命试验检测其抗衰老作用,分别使用邻苯三酚自氧化法、钼酸铵比色法、硫代巴比妥酸(TBA)法测定果蝇体内超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量。利用统计学软件SAS v6.12对试验数据进行分析。结果表明:培养基中添加海带多糖能延长果蝇平均寿命,寿命延长的百分率与喂食果蝇的海带多糖浓度有一定的量效关系,培养基中海带多糖浓度为0.25%、0.50%、1.00%时,与对照组相比,雌果蝇寿命延长百分率分别为5.20%、6.20%、9.20%,雄果蝇寿命延长百分率分别为4.60%、5.00%、6.00%;饲喂海带多糖后果蝇体内的SOD、CAT活性提高,与对照组相比,海带多糖添加量为0.50%和1.00%时,雌性果蝇SOD、CAT活性提高量达到显著水平(P<0.05),MDA降低量达到显著水平(P<0.05);海带多糖添加量为1.00%时,雄性果蝇SOD与CAT活性提高量达到显著水平(P<0.05),MDA含量降低。提示提高生物体内抗氧化酶活力,降低衰老物质前体的含量可能是海带多糖抗衰老的途径之一。     

外源水桶酸对镉胁迫下月季叶片超弱发光的影响

通过对月季叶片超弱发光强度及SOD活性和MDA含量测定,结果表明:当外源水杨酸浓度达到50mg.L-1时,SA可以缓解镉对月季叶片的胁迫作用,降低活性氧的含量,并减弱月季叶片延迟发光的强度,同时也表明植物体内活性氧的含量改变与植物延迟发光的衰减趋势有着直接的联系。     

虾类氨基酸营养需求的研究进展

氨基酸是虾类的重要营养素之一，其在虾的生长发育过程中起着重要作用，本文介绍了作为虾类饵料和诱食剂的氨基酸需求量研究的新成果，并对可供开发的氨基酸含量丰富的蛋白源做了总结，探讨了今后的主要发展方向。