LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的建立

[目的]采用脂多糖(LPS)作为刺激源,建立奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)氧化损伤模型.[方法]体外培养BEEC并进行细胞鉴定,用不同浓度的LPS刺激细胞,在不同时间点用CCK-8法测定细胞存活率,以确定BEEC氧化损伤模型条件.倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT).[结果]与空白对照组相比,当LPS浓度为80μg/mL,作用时间为12 h时,造成细胞损伤,其细胞凋亡率、ROS产生量和MDA含量明显高于对照组,SOD和CAT活性显著低于对照组.[结论]建立奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的条件为LPS作用浓度80 μg/mL,作用时间12 h.     

阿魏酸抗LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性作用

[目的]为了探明阿魏酸的抗炎机制.[方法]采用组织块培养法获得奶牛子宫内膜上皮细胞.用噻唑蓝(MTT法)检测细胞活力.采用荧光定量PCR方法,分别对对照组、模型组、药物作用高、中、低剂量组在LPS作用3h、6h炎症基因IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA变化进行检测.[结果]阿魏酸在一定浓度范围内对细胞增殖无显著影响.药物预处理细胞能够显著降低LPS诱导的IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达.[结论]阿魏酸能够显著降低LPS刺激细胞后炎症细胞因子的表达,说明阿魏酸是通过抑制炎症因子的表达发挥其抗炎作用.     

澳洲淡水龙虾的养殖技术

澳洲淡水龙虾又名红螯螯虾(Chetax Quadricarinatus)，原产于澳大利亚，外形酷似海中龙虾．是目前世界上最名贵的淡水经济虾种之一。它不但外观诱人，更重要的是肉质鲜美、脆嫩可口；蛋白质含量高而脂肪含量低，使之成为名符其实的健康食品。笔者从2001年开始试养澳洲淡水龙虾，经过4年多的实践和探索，总结出一套行之有效的养殖方法，以供养殖同行参考。     

安石榴苷对热应激后IEC-6细胞HSPs表达及凋亡影响

[目的]本试验旨在研究安石榴苷对热应激大鼠肠上皮细胞(IEC-6)损伤的预防作用.[方法]通过MTT法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态学变化;RT-PCR检测HSP27、HSP70、HSP90的mRNA变化;AO/EB检测细胞凋亡.[结果]筛选热应激最佳时间为42℃6h,安石榴苷预处理细胞低中高浓度分别为2.5、5、10 μmol/L;药物预处理细胞后细胞损伤及凋亡程度减轻,能够显著抑制HSP27、HSP70、HSP90的高表达.[结论]安石榴苷对IEC-6细胞热应激损伤具有显著预防作用,HSP27、HSP70、HSP90参与安石榴苷对IEC-6细胞热损伤预防作用的调控.     

龙须菜精粉的研制

龙须菜(Gracilariaverrucosa)又名江蓠,是一种高纤维、高蛋白,低脂肪,低热能,且富含矿物质和维生素的天然海洋蔬菜,以“鹿角菜”、“凤菜”等名称入药,味性寒,有软坚化痰、清热利水的功效。龙须菜能大量吸收海水中的N、P和CO2,释放O2,净化海     

苦参碱对奶牛子宫内膜上皮细胞抗炎作用及其机制

为探究苦参碱在抗炎方面的作用,本试验用LPS建立奶牛子宫内膜上皮细胞炎症损伤模型,通过MTT法测得LPS最佳刺激浓度为30μg/mL,作用12h;苦参碱的低中高浓度分别为5、10、20μg/mL。RT-PCR分别检测3、6、12h各组细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8)mRNA的表达变化,结果表明,苦参碱显著(P0.05)降低TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的表达,具有较强的抗炎作用。     

连翘酯苷A对IBV感染细胞内受体和抗病毒基因表达的影响

【目的】研究连翘酯苷A体外抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)作用及机理。【方法】MTT检测细胞活力,连翘酯苷A作用于IBV感染细胞36h,Quantitative Real-time PCR检测细胞内IBV N基因变化、细胞内受体(MDA5,LGP2,NLRC5)和抗病毒基因(IRF7,IFN-α,IFN-β)mRNA表达变化。【结果】连翘酯苷A作用于IBV感染细胞36h,可显著抑制细胞内IBV复制,同时显著提高细胞内受体(MDA5,LGP2,NLRC5)和抗病毒基因(IRF7,IFN-α,IFN-β)mRNA表达。【结论】连翘酯苷A具有抗IBV作用,且能激活IBV感染细胞内受体(MDA5,LGP2,NLRC5)和抗病毒基因(IRF7,IFN-α,IFN-β)。     

比较MTS与MTT用于大鼠热应激模型中肠上皮细胞活力检测

[目的]MTT法与MTS法线性关系比较与热应激模型筛选.[方法]以IEC-6及SF9细胞为研究对象,取对数生长期细胞,设置4个接种浓度,将两种细胞制成对应浓度细胞悬液接种于96孔板24 h,分别加入两种试剂后在490 nm处读取OD值.根据OD值确定两种细胞最佳接种浓度.并根据OD值比较两种检测细胞活力方法哪种更加适合于动物贴壁细胞IEC-6细胞活力测定.取最适浓度的IEC-6细胞加入MTS后孵育1.5、2.5、3.5h三个不同时间点检测OD值,根据OD值确定最佳孵育时间.将IEC-6细胞在最佳接种浓度下接种于96孔板24 h,分别在43、41、39℃下采用不同热应激时间4、8、12、24 h,测定OD值,根据OD值确定IEC-6细胞热应激模型.[结果]MTS法在动物贴壁细胞IEC-6及植物半贴壁细胞SF9中检测的准确度度高,灵敏度好,是比MTT法更优的检测贴壁细胞增殖活性的方法.IEC-6细胞最佳接种浓度为4.1×104/mL至5.5×104/mL,SF9细胞最佳接种浓度为3.28×105/mL至4.4×105/mL.MTS最佳孵育时间为3.5h,并确定大鼠空肠上皮细胞热应激模型为43℃,6h.[结论]检测贴壁不牢的细胞活力时MTS法优于MTT法,并成功建立IEC-6细胞热应激模型.     

静水池塘简易人工繁殖设施的设计与使用

浙江省宁波市北仑柴桥鱼种场是一个有鱼种塘45亩专业从事淡水鱼种生产的小型渔场,由于受资金及土地的限制,该场不具备水塔、产卵池、孵化环道(孵化桶)等产卵孵化设施,多年来一直未从事过四大家鱼等鱼类的人工繁殖育苗生产。北仑区水产技术推广站在承担赤眼鳟人工繁殖及苗种培育技术研究课题后,为促进赤眼鳟这一优