不同因子对花鲈胚胎干细胞增殖的影响

胚胎干细胞(ES细胞)是从动物早期发育胚胎中分离出来的具有发育全能性的一种未分化细胞系。维持花鲈胚胎干细胞(LJES1)的体外生长、增殖及未分化状态需要在培养基中添加一些生长因子。实验通过配制省略1种或多种因子的培养基PESM0～10，计数LJES1细胞在各培养基中增殖的数量，确定各种生长因子对LJES1细胞的增殖作用。同时，对LIF因子和bFGF因子的作用进行了重点的研究，发现LIF因子对早期的LJES1细胞增殖几乎没有作用，其主要作用是维持LJES1细胞的未分化状态，但对晚期LJES1细胞的增殖有一定的作用；bFGF因子对LJES1细胞有强烈的刺激增殖的作用；鲈鱼胚胎抽提液(PEE)以及鲈鱼血清(FS)也促进了LJES1细胞的增殖，2-巯基乙醇(2-ME)具有还原血清中的含硫化合物、防止过氧化物对LJES1细胞的损害及促进贴壁的作用，因而也促进了LJES1细胞的增殖。     

显微注射技术在制备鱼类嵌合体和转基因海水鱼上的应用

以鱼类胚胎细胞和胚胎干细胞为核供体进行细胞移植构建鱼类嵌合体研究方面,现有的成功报道均采用显微注射方法;在转基因海水鱼类研究中,显微注射也是最为常用的技术,本实验室在花鲈胚胎干细胞嵌合体构建和外源基因向花鲈胚胎的转移研究中取得的结果也充分证实,显微注射技术是开展海水鱼类细胞移植和转基因研究的首选技术。     

三种脂质体介导的花鲈胚胎干细胞转化效率的比较

通过3种脂质体(genejammer, genejuice和metafectene)介导绿色荧光蛋白基因转化花鲈胚胎干细胞，探讨不同脂质体介导的花鲈胚胎干细胞（LJES1）的转化效率，以及影响外源基因转化效率的因素，如细胞接种时间、初始接种密度、DNA和脂质体用量以及它们之间的比例等。实验发现，genejammer转化LJES1细胞效率最高，适合于该细胞系的转化。对于同一种脂质体，DNA与脂质体用量的比例对于绿色荧光蛋白基因转化LJES1最为重要，DNA与genejammer的比例为1∶6时，转化效率最高，为27.3%；DNA与genejuice的比例为1∶4时，转化效率最高，为12.1%；而DNA与metafectene的比例为1∶3时，转化效率达到最高，为5.3%。随着DNA、脂质体量的增加，转化效率有所提高，但达到一定的用量后，转化效率反而下降。     

适合花鲈的几种染色体制备方法的比较

比较了6种适于制备花鲈(Lateolabrax japonicus)染色体的制片方法。结果表明,细胞系(LJES)培养法和头肾-PHA活体注射-淋巴分离液富集法可制备高质量的染色体标本;外周血短期培养法和头肾-PHA活体注射法得到的结果重复性好,但制片时有红细胞的干扰;小鱼游泳法和组织浸泡法操作简单,适于野外条件下的染色体制备,但得到的染色体图象有背景杂质,分裂指数较低,仅适用于染色体组型的研究。