高温诱导对尼罗罗非鱼性别分化及生长的影响

采用自雌鱼口腔中取出受精卵人工孵化的方法建立了尼罗罗非鱼家系20个。受精后9d,将各家系鱼苗分成两份,分别在28℃(对照组)和36℃(高温诱导组)下养殖,诱导处理12d后,统计高温诱导期成活率并将实验鱼转入自然水温下培育,养殖60～120d后对各实验组的雄性率及生长情况进行测定。结果表明,高温处理对仔鱼的成活率没有影响,但能显著提高某些家系的雄性率,如F27(诱导组88%,对照组49%)、F37(诱导组90%,对照组53%)和F41(诱导组91%,对照组53%);高温处理后多数家系的雄性率略有升高,但不显著;有两个家系高温诱导组雄性率低于对照组,分别是F8(诱导组43%,对照组46%)和F35(诱导组29%,对照组38%),这显示了尼罗罗非鱼性别分化受遗传和环境因子共同作用。生长情况测定结果表明,高温诱导对发育初期罗非鱼的生长没有显著影响。本研究结果说明,高温处理能显著提高某些家系的雄性率,高温诱导和家系选择有望成为高雄性率尼罗罗非鱼新品种培育的新的技术手段。     

DNA指纹技术鉴定尼罗罗非鱼各家系父本

为了对8个尼罗罗非鱼家系进行亲子鉴定,利用GM024、GM435、GM459、UNH719、UNH846、GM558六个微卫星标记设计引物并进行PCR扩增,在12%聚丙烯酰胺凝胶上电泳分型,应用cervus3.0软件统计分析。结果表明,各微卫星位点的等位基因数在4~12之间;观测杂合度在0.313~0.988之间,平均观测杂合度为0.696;期望杂合度在0.318~0.794之间,平均期望杂合度为0.638。平均多态信息含量为0.608。已知一亲本时,各个位点的非父排除率在0.301~0.818之间;双亲未知时,各位点的累计排除率在0.113~0.69之间。当已知一亲本时,6个位点的累积排除率达到了0.9962。当双亲都未知时,6个位点的累积排除率也达到了0.9674。所以利用这6个位卫星位点能够有效地确认尼罗罗非鱼各家系父本。     

斑点叉尾鮰血浆铜蓝蛋白的全长cDNA克隆及表达特征分析

本研究克隆了斑点叉尾鮰中血浆铜蓝蛋白基因全长cDNA序列，其中5′非翻译区(5′-UTR)25 bp、3′非翻译区(3′-UTR) 860 bp、开放阅读框(Open reading frame，ORF) 3 225bp，编码一条含有1 074个氨基酸的多肽链。与其他真核生物血浆铜蓝蛋白成员进行同源性比较，表现出较高的保守性。本研究利用荧光实时定量PCR技术分析了斑点叉尾鮰血浆铜蓝蛋白基因在正常组织和被不同病菌感染后的肝脏、肠、头肾及脾脏中的表达。结果发现，正常组织中血浆铜蓝蛋白基因在正常肝脏中表达最强烈。4种病原（迟钝爱德华氏菌、海豚链球菌、嗜水气单胞菌和斑点叉尾鮰呼肠孤病毒）引起的血浆铜蓝蛋白基因的应答在不同组织中都有差异。血浆铜蓝蛋白基因对海豚链球菌的应答最为显著，而对呼肠孤病毒的应答最不明显。而且不难发现，感染4种病原菌后，血浆铜蓝蛋白基因在头肾中的表达都出现明显的上调。