鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因在毕赤酵母中的分泌表达

根据Gen Bank中鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白全基因序列设计特异性引物,以SVCV欧洲株病毒核酸为模板,通过RT-PCR方法获得欧洲株SVCV-G基因,克隆至p PICZαA,构建p PICZαASVCV1540表达质粒。以限制性内切酶Sac I线性化p PICZαASVCV1540后通过化学法转化毕赤酵母感受态细胞X33和GS115,添加1%甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物显示其分子质量为70 ku。Western Blot分析显示该蛋白可以被SVCV山羊多抗识别,表明目的蛋白具有反应原性。     

传染性造血器官坏死病病毒参考蛋白的研制

为规避活病毒作参考物质存在的生物安全风险,本研究利用毕赤酵母表达系统表达了传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白来制备参考蛋白,作为IHNV免疫学检测参考物质。本研究选用IHNV糖蛋白基因(IHNV-G)为目的基因,根据Gen Bank中IHNV全基因序列设计特异性引物,以IHNV-uk株病毒核酸为模板,通过RT-PCR获得糖蛋白基因片段,将其克隆至真核表达载体p PICZαA,转入毕赤酵母感受态细胞GS115中,使外源基因与酵母基因融合,通过1%甲醇诱导表达外源蛋白,SDS-PAGE分析显示获得可溶性表达蛋白,分子量大于70 ku。经Western Blot和ELISA分析,该表达产物可以被IHNV多抗特异性识别。0.1531 mg的重组蛋白与0.3125TCID50 IHNV在ELISA实验中反应原性相当,–20°C可稳定保存2个月,说明其在一定程度上可替代病毒作为参考物质。该研究为IHNV ELISA检测试剂盒的开发奠定基础。     

鲑鱼甲病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）检测方法研究

鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)是鲑鱼胰脏病(Salmon pancreas disease,PD)病原,主要感染鲑科鱼类,目前在我国尚未分离到。为提高出入境鱼类中的SAV检测效率,根据SAV nsP1基因片段,设计3对特异性引物,建立了检测SAV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。该方法使用25μL反应体系,经优化后的反应温度为65℃,反应时间为1 h,检测限可达10个拷贝数的病毒核酸,且不与传染性鲑鱼贫血病毒、病毒性出血性败血症病毒、传染性造血器官坏死病毒、病毒性神经坏死病病毒、草鱼呼肠孤病毒和鲤春病毒血症病毒的RNA产生交叉反应。在反应体系中加入染料后,反应结果肉眼直接可见。本研究建立的RTLAMP方法是一种特异性强、方便快捷的SAV检测方法,适合SAV的现场初筛和核酸检测。     

试析汽轮机液压调速系统发生摆动原因分析及排除

针对汽轮机液压调速系统发生摆动的问题,对其产生的内部及外部原因进行分析,得到解决问题的方法。即通过对机械传动结构和油料系统进行维护检修,重新测量并绘制了负荷-转速的静态曲线来指导生产,进而消除了汽轮机液压调速系统摆动的现象。为使用者提供了可以持续稳定产生的蒸汽,有助于汽轮机组的生产效率及发电功率的提升,延缓了使用的年限,有利于经济效益的提高,产业的发展。     

金鱼造血器官坏死病传入风险评估

为评估鲤科疱疹病毒-2型（Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2）随水生动物及产品跨境传入风险,按照OIE传入风险评估框架,从危害识别、风险评估及风险管理3个方面,开展了CyHV-2跨境传入风险分析,并提出了相应的风险控制措施。分析认为：养殖用活易感鱼类的风险预测为高,而食用的、冰冻和冰鲜的以及用做饵料的易感鱼类风险预测为中,易感鱼类加工后的产品、非易感鱼类及运输活鱼的水、包装、工具等风险预测为低。建议对进口的活易感鱼类（金鱼、鲫鱼及其普通变种）,严格采取相应的风险管理措施;对食用的、冰冻和冰鲜的易感鱼类避免从疫区进口,用做饵料的易感鱼类改用经过加工处理后的野杂鱼;而加工后的鱼制品及非易感鱼类,可允许自由贸易;对运输活鱼的水、包装等进行强制常规消毒。     

口岸截获猪肉肠的主要猪病病原核酸检测

为了解非法跨境携带猪肉肠传播动物疫病的风险,对北京口岸截获的猪肉肠进行8种猪病病原核酸的检测分析。结果显示:282份样品中,猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)以及猪细环病毒1型(TTSuV1)均有检出;除PRV阳性率较低外(3.9%),其余3种阳性率较高,均大于35%。这表明口岸非法携带猪肉肠存在传播多种动物疫病的风险,提示相关执法部门应强化口岸动物检疫,降低疫病传入风险。     

蛙病毒的传入风险分析

为评估蛙病毒跨境传播的风险,提出科学可行的控制手段,对导致蛙病毒进入我国的可能因素进行了风险分析。分析结果显示:传入蛙病毒的主要威胁是来自疫区的活的养殖用两栖类动物,其次是养殖用爬行类动物。对进口活的养殖用两栖类,要求出口渔场进行2年以上的监测。对用于动物园或实验室的敏感动物,建议不从疫区进口;对进口动物种蛋,要进行表面消毒;对其它敏感鱼类(活的和冰冻、冰鲜的),在不从疫区进口的前提下,需要进口后抽样检疫;对加工后的制品以及其它非敏感水生动物,可以自由贸易。对运输活鱼的水、包装等需要强制进行常规消毒。这些检疫措施,是按照SPS的原则和科学原则提出来的,不仅能保障进口两栖和爬行类动物对我国水产养殖的安全,也能降低对国际贸易的消极影响。     

病死猪圆环病毒2型检测及全基因序列分析

为准确检测猪圆环病毒2型（PCV2）并分析其基因序列情况，在序列比对分析的基础上，设计一对简并引物和一条探针，经体系优化建立了PCV2的荧光PCR方法。该方法可检出10拷贝的PCV2质粒DNA，不与猪瘟病毒等多种病毒发生交叉反应。对送检的2批次45份病死猪脏器进行检测，检出25份阳性样品，与套式PCR方法的复合率为95.6%；对3份强阳性样品使用一对全基因组扩增引物，扩增了PCV2型全基因片段；经克隆测序后分析，发现3个病毒基因分别属于2种基因亚型（PCV2b和PCV2d）。本研究对于PCV2的准确检测及其变异特征的了解具有参考意义。     

国礼动物变化趋势及检疫监管

为了解国礼动物发展现状,给优化检疫管理政策提供支持,本文梳理了自1949年以来我国接收国礼动物和作为国礼走出国门的年代、动物物种及赠送和受赠国家等情况,阐述了动物作为国礼的原因、变化趋势,分析了其在政治、运输饲养、疫病传播等方面存在的风险,提出了通过部门协作、通关运输、隔离检疫、饲养与治疗、防疫消毒、信息沟通、应急处置等措施,来提升对国礼动物监管水平的建议。