两种杂交石斑鱼及其亲本的形态差异分析

为研究两种杂交石斑鱼及其亲本的形态差异，实验采用传统形态学测定与现代框架测定结合的方法，测定了青龙斑（斜带石斑鱼♀×鞍带石斑鱼♂）和虎龙斑（棕点石斑鱼♀×鞍带石斑鱼♂）及其亲本的可数性状和可量性状，并进行相关统计分析。结果显示，在外观方面，青龙斑与亲本相比，其斜带边缘清晰连贯，而虎龙斑体侧分布有不同于亲本的大型环状斑；在外部形态框架方面，青龙斑背鳍前端及躯干形态都偏向于母本，呈现出背腹部压缩的细长型，而虎龙斑背鳍前端的框架形态偏向于母本、躯干的框架形态却偏向于父本，呈现出两种框架形态组合的特点。综合传统可量数据和框架数据聚类分析、判别分析和主成分分析的结果表明：两种杂交石斑鱼在外部形态方面更偏向于母本。  

急性操作胁迫对刀鲚应激反应相关神经内分泌因子的影响

为深入了解刀鲚应激反应中相关神经内分泌因子作用的分子机理，采用手工捕捉的方式对刀鲚进行了急性操作胁迫。通过放射免疫法和化学发光法测定刀鲚应激反应后头肾和血浆皮质醇含量的变化，结果显示，刀鲚胁迫刺激后血浆皮质醇含量极显著性升高，血浆皮质醇浓度平均升高56.48%，头肾皮质醇含量显著性升高，头肾皮质醇浓度平均升高49.68%，表明急性操作胁迫确实引起刀鲚的应激反应。通过同源克隆的方法获得刀鲚促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、硬骨鱼紧张肽（UI）、阿黑皮素原（POMC）基因的部分序列，并应用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法检测上述神经内分泌因子mRNA的表达变化，结果显示，CRH基因的表达水平极显著性下降，POMC基因的表达水平显著性下降，UI基因的表达水平有下降趋势但不显著。上述结果显示，皮质醇、CRH、UI和POMC等神经内分泌因子通过鱼类下丘脑—脑垂体—肾间腺轴参与刀鲚应激反应的调节，为进一步了解刀鲚胁迫应答的作用机理，实现对其有效调控打下基础。  

两种杂交石斑鱼子一代杂种优势的微卫星标记分析

使用6对微卫星引物对两种杂交子一代(青龙斑和虎龙斑)及其亲本(斜带石斑鱼、棕点石斑鱼和鞍带石斑鱼)共5个群体进行微卫星分析,计算等位基因频率、有效等位基因数、基因杂合度、多态信息含量、相似指数和Nei氏遗传距离。结果显示,在5种石斑鱼中,棕点石斑鱼的平均有效等位基因数最大(6.849 3),最小的是鞍带石斑鱼(2.608 6)。6对微卫星引物在这5个群体中具有丰富的多态性,平均多态信息含量(PIC)分别为0.666 7、0.751 3、0.441 9、0.664 0、0.542 6。在平均观测杂合度(H_o)中,虎龙斑和青龙斑的最高均为0.940 0,鞍带石斑鱼的最低为0.508 3。遗传距离和遗传相似率结果显示,青龙斑和虎龙斑均与父本鞍带石斑鱼的亲缘关系较近。杂交子一代群体的等位基因基本来自父母本群体双方,可推断杂交子一代的遗传物质来自父母双方,属两性融合生殖,是真正意义上的杂交种。杂交后代的遗传变异水平明显增强,这是杂种优势得以形成的重要遗传物质基础。  

人工诱导花鳗鲡卵巢发育成熟及相关激素和组织的作用

采用多次肌肉注射黄体生成素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH-A2)和鲤脑垂体匀浆(carp pituitary extract,CPE)的方法诱导花鳗鲡卵巢发育成熟。在任意挑选的15尾实验组鱼中,5尾卵巢发育完全成熟,平均性腺系数(gonadosomatic index,GSI)为(20.9±5.04)%(最大达到27.3%);5尾卵巢发育至成熟期,平均GSI为(7.2±2.86)%;5尾卵巢发育至卵黄生成期,平均GSI为(2.32±1.5)%;而对照组的性腺停留在未发育的Ⅱ期[GSI为(1.18±0.39)%],这表明注射的激素能诱导雌性花鳗鲡性腺发育直到完全成熟。检测卵巢发育过程中脑垂体GtH的mRNA水平,血清中类固醇激素水平以及肝脏和消化道组织学变化。结果表明,脑垂体中GtHα、LHβ和FSHβ的mRNA水平随着卵巢的发育而逐渐增加,在卵巢发育成熟后下降,其中GtHα和LHβ的含量在卵巢发育成熟时虽比发育时期略有下降,但仍然呈现高表达量,而FSHβ在卵巢发育成熟时的表达量极低,几乎检测不到。血清雌二醇的含量在卵巢开始发育和卵黄生成期时的含量...  

养殖鱼类生殖内分泌调控相关功能基因的研究和应用

新型的神经内分泌因子kisspeptin与GnIH(gonadotropin-inhibitory hormone)对哺乳动物的生殖轴起着直接而相反的调控作用,kisspeptin刺激脑垂体促性腺激素(GtH,gonadotropin)的合成与释放,而GnIH抑制GtH的合成与释放.然而,在鱼类中,相关研究甚少.本研究室利用比较基因组学技术,通过同线性分析结合分子生物学手段,在斑马鱼(Danio rerio)、金鱼(Carassius auratus)中克隆得到了kisspeptin(kiss1、kiss2)与GnIH以及它们相关受体的基因cDNA序列.氨基酸序列同源比对结果显示:在脊椎动物中,kisspeptin的核心肽相对保守,而GnIH的核心肽在不同物种中则有较大的差异.比较基因组分析显示kisspeptin与GnIH基因在鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类都维持着保守的同线性结构;并且,同线性的结果表明,鱼类kiss1与kiss2基因来源于早期的基因组复制,在漫长的进化过程中,哺乳类丢失了kiss2基因.通过配体受体结合实验,证明2种kisspeptins均能激活其相关受体GPR54(GPR54a、GPR54b),启动下游通路,但却存在一定的配体-受体选择性差异.金鱼、斑马鱼组织表达模式研究显示:kisspeptins与GnIH以及它们相关受体在生殖相关组织或区域(下丘脑、垂体、性腺)均有丰富的表达,提示kisspeptins与GnIH可能参与鱼类的生殖调控.通过化学合成金鱼kisspeptins与GnIH的核心肽,在体注射成熟的雌性金鱼,发现kiss1能显著刺激金鱼LH的分泌,并且能诱导金鱼排卵,而kiss2不能;在高剂量的状况下,GnIH亦能有效抑制金鱼LH的分泌.然而,在离体实验中,2种kisspeptin与GnIH对金鱼垂体细胞LH的分泌均没有显著的影响,提示kisspeptins与GnIH对金鱼的LH调控可能发生于下丘脑水平.以上结果表明:与哺乳动物相类似,在鱼类生殖轴中也存在kisspeptins与GnIH的正负调控系统.本文侧重对这项研究以及相关的研究成果进行归纳与分析,旨为深入探讨鱼类生殖内分泌调控相关功能基因提供参考.  

人工诱导花鳗鲡的精巢发育成熟及其精子的生物学特性

用肌肉注射HCG的处理方式（剂量为500U/㎏•体重，每周注射1次，注射时间为6周）诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟，成熟率达80.0%。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明：花鳗鲡精子头部长径为3.81±0.69µm，短径为1.24±0.15µm；尾部长度为24.83±3.05µm；精液pH为7.3~7.5，精子密度为1.02×1010尾/ mL。精子的适宜盐度为15~20，其中盐度为15时，精子激活比率最高，快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6.0~8.0，pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外,4 种金属离子(Mg2+、Ca2+、Na+和K+)对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致，金属离子浓度过高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而MgCl2、CaCl2、KCl、NaCl溶液浓度为0.4~0.6g/mL时，精子活力最好，最高激活比率为3级（41.0%~60.0%）。  

鲟鱼GtH放射免疫测定方法的建立及催产前后史氏鲟血清GtH含量的变化

用蛋白质快速液相层析(FPLC)分离俄罗斯鲟鱼脑垂体促性腺激素（GtH），共获得GtH纯化蛋白4.6mg。用SDS-PAGE变性胶电泳图谱初步分析纯化蛋白，用反相高效液相色谱（rpHPLC）分离出两个亚基，质谱测定α亚基分子量：15603KD，两个β亚基分子量分别为14338KD和14694KD。制备了鲟鱼GtH的兔抗血清多克隆抗体，采用氯胺T法用125I标记抗原，用羊抗兔γ球蛋白做二抗，建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。测定了催产前后不同时间史氏鲟血清中GtH含量的变化，统计分析表明成功排卵的雌鱼比未排卵和阴性对照组在催产后12小时和16小时GTH分泌量升高显著，最高达到234ng/ml；催产效应时间与催产后血清中GtH的含量紧密相关。  

养殖刀鲚与生长环境菌群PCR-DGGE指纹图谱及多样性分析

为了分析养殖刀鲚(Coilia nasus)体内与生长环境菌群结构，利用PCR-DGGE技术，对养殖刀鲚鳃、胃、肠道壁、肠内容物和养殖水体菌群结构进行了初步分析。PCR-DGGE指纹图谱分离显示42条清晰条带，其中养殖水体(27)、鳃(9) 、胃（13）、肠道壁（19）、肠道内容物（18）及香农指数分别为3.037、1.883、2.193、2.825、2.683；养殖水体与刀鲚鳃、胃、肠道壁及肠道内容物分别具有6、9、11、8共有带。UPGMA聚类分析显示：样品三个重复相似度都在95%以上，差异不明显；不同样品之间，养殖刀鲚鳃和胃聚为一支，具有较高的相似度为76%，同时与养殖水体相似度29%；养殖刀鲚肠道壁和肠道内容物聚为一支，相似度为38%。 回收测定所有显示条带主要包含：变形菌、放线菌、拟杆菌、柔膜菌、蓝藻细菌、厚壁菌、梭杆菌及少量未定义菌种。 结果表明，PCR-DGGE 技术能区分养殖刀鲚主要部位及水体微生物的结构差异和多样性，澄清养殖刀鲚及生长水体微生物区系，可在定植益生菌的开发上具指导意义。  

温度对白斑狗鱼耗氧率、窒息点及主要生化指标的影响

在不同温度下,测定了平均体重为(597.2±96.3)g的白斑狗鱼(Esox lucius)的呼吸耗氧率、窒息点及主要生化指标。结果显示:在水温为3℃、8℃、13℃和18℃下,白斑狗鱼的耗氧率随着温度的升高而显著上升(P<0.05)。3℃时耗氧率最低;为(0.0047±0.000017)mg/g.h,18℃时耗氧率最高;为(0.029±0.0011)mg/g.h。当水温在13℃时,白斑狗鱼的昼夜平均耗氧率在(0.020±0.0031)mg/g.h,15:00耗氧率最低,11:00耗氧率出现最高值。Q10值的变化显示白斑狗鱼的耗氧率对温度具有敏感性,13～18℃时,Q10最小,此温度为白斑狗鱼的较适生长温度。在高温下(18℃),白斑狗鱼呼吸急促,呼吸频率达到(68.50±3.58)次/min;在低温下(3℃),白斑狗鱼呼吸缓慢,呼吸频率下降到(29.00±4.31)次/min。白斑狗鱼的窒息点随着水温的升高而增大,水温为13℃,其窒息点最高为1.68 mg/L,水温为3℃时,其窒息点最低为0.82 mg/L。随着水温的不断上升,白斑狗鱼的肝糖元含量、肝胰脏中的乳酸含量显著减少(P<0.05)。肝糖元含量由(67.70±6.66)mg/g降至(41.83±3.72)mg/g。乳酸含量由(0.36±0.0041)mmol/gprot降至(0.15±0.0034)mmol/gprot。肝胰脏中的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的酶活力随着水温的升高而小幅缓慢下降,分别由(21.51±0.69)U/gprot和(22.34±0.43)U/gprot降至(19.04±0.62)U/gprot和(18.10±0.41)U/gprot。  

湖鲚体内与生长环境菌群PCR-DGGE指纹图谱及多样性分析

利用PCR-DGGE技术,选择细菌原核通用引物F357-GC和R518对太湖湖鲚(Coilia ectenes taihuensis)鳃、肠壁及肠内容物及其生长环境菌群结构进行了初步分析。结果显示:PCR-DGGE指纹图谱分离显示49条清晰条带,样品菌群丰富度(DGGE条带数):湖水(33)>肠道壁(23)>湖泥(18)>肠道内容物(16)=鳃(16);相应的香农多样性指数分别为:3.11、2.76、2.21、2.37、2.30。湖鲚肠道壁、肠道内容物和鳃与湖水分别具有14、14、10条共有带,切胶回收测定其中21条优势条带,主要包含:变形菌(Proteobacteria)、放线菌(Actinobacteria)、拟杆菌(Bacteroidetes)、柔膜菌(Tenericutes)、蓝藻细菌(Cyanobacteria)、厚壁菌(Firmicutes)。结果表明PCR-DGGE指纹图谱能够清晰显示湖鲚不同部位及其生长环境细菌群落结构和区分其菌群结构差异,并阐明生长水域环境是影响湖鲚体内细菌菌群结构组成的主要因素之一。