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文章采用基因定点突变和报告基因技术作A/T富集区启动子鉴定和转录调控分析,研究鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区是否具有启动子活性。PromPredict预测分析提示miR-17-92基因簇上游-388～-444 bp处可能是启动子区域。转录因子结合位点分析发现,A/T富集区存在3个E2F1潜在结合位点,分别位于miR-17-92基因簇上游-1 273 bp(结合位点1)、-1 186 bp(结合位点2)和-753 bp(结合位点3)处。报告基因活性分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区具有启动子活性,其中miR-17-92基因簇上游-440/-1区域启动子活性最强。共转染分析显示,转录因子E2F1极显著抑制该A/T富集区启动子活性(P<0.01);进一步定点突变分析表明E2F1通过E2F1结合位点1和2抑制A/T富集区启动子活性。报告基因分析发现,与对A/T富集区启动子作用不同,E2F1促进miR-17-92基因簇宿主基因(MIR17HG)启动子活性。文章首次发现鸡miR-17-92基因簇上游存在一个新的转录调控区,对揭示鸡miR-17-92基因簇转录调控具有重要意义。 相似文献
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前期研究发现，鸡PPARγ基因转录本5(c PPARγ5)的5’非翻译区（5’untranslated region,5’UTR）存在两个上游开放阅读框（uORF1和uORF2）。为揭示这两个uORFs在鸡PPARγ基因表达转录后调控作用，试验使用报告基因、定点突变、q RT-PCR和Western blot等技术，分析两个uORFs对报告基因活性及PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。结果表明，与野生型相比，uORF1和uORF2分别突变和同时突变均显著促进报告基因活性及PPARγ m RNA和蛋白表达（P<0.05）。mRNA稳定性分析发现，两个uORFs突变对报告基因mRNA稳定性无显著影响。启动子活性分析发现，c PPARγ的5’UTR区具有启动子活性。研究结果表明，cPPARγ5的两个u ORFs抑制其翻译。 相似文献
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