激活素A和胰岛素样生长因子-I对冷冻保存后小鼠腔前卵泡体外培养的影响

为了探讨激活素A和胰岛素样生长因子-I对冷冻保存后小鼠腔前卵泡体外发育的影响,试验分别在培养液中加入激活素A和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)对小鼠腔前卵泡进行体外培养.结果表明:激活素A组和激活素A+IGF-I组的成活率显著高于未添加因子的冷冻对照组和IGF-I组(P<0.05);激活素A组、IGF-I组、激活素A...     

腺病毒介导的神经生长因子对小鼠宫颈癌的作用

为观察腺病毒介导的神经生长因子对宫颈癌小鼠的作用效果,采用U14细胞注射建立宫颈癌小鼠模型,腺病毒介导的人神经生长因子瘤周注射2次,每周1次。结果表明,体外试验表明腺病毒介导的神经生长因子对癌细胞有一定的抑制作用,能引起细胞凋亡。体内试验表明腺病毒介导的神经生长因子的用量低于1×107PFU时,对宫颈癌的抑制率和免疫器官指数的影响均呈线性升高趋势;在用量为1×107PFU时,抑瘤率最高,达到50.89%;而当腺病毒介导的神经生长因子用量达到1×108PFU时,抑瘤率降低为-0.13%。     

成年兔睾丸支持细胞的分离纯化

简化睾丸支持细胞的分离纯化方法,提高支持细胞的获取量和活率。取5月龄公兔,去除睾丸被膜及血管,分离出完整的曲精细管后用0.5%胰蛋白酶和0.1%胶原酶消化并进行低渗处理,将制成的细胞悬液植入25cm2的培养瓶,于38.7℃5%CO2条件下培养,此期间每天用倒置显微镜进行观察。结果表明,经1/3组低渗处理后,离体支持纯度和活率分别达到72.04%和84.5%(P<0.05),极大地提高了离体支持细胞的获取量和活率。     

成年兔睾丸支持细胞的分离纯化研究

本试验以5月龄公兔为试验动物,去除睾丸被膜及血管,分离出完整的曲精细管后 用0．5％胰蛋白酶和0．1％胶原酶消化并进行低渗处理,将制成的细胞悬液植入25 cm2的培 养瓶,于38．7℃、5％CO2条件下培养,结果表明:经1:3Hanks超纯水低渗处理后,离体支持 细胞纯度和活率分别达到72．04％和84．5％,显著提高了离体支持细胞的获取量和活率。     

麝研究现状与展望

麝是我国珍贵的药用野生动物资源 ,保护和利用好我国的麝资源 ,进行科学人工养殖 ,实现麝资源可持续利用是一条利国利民的正确道路。本文就 40年来有关麝在驯化饲养、食性、生态习性、繁殖、疾病防治等方面的研究历史及现状作一评述 ,并对麝的人工繁育方面提出自己的见解 ,期望对我国麝类研究的进一步深入有所启示     

人乳铁蛋白腺病毒载体的构建及细胞表达

将人乳铁蛋白基因与腺病毒基因组骨架质粒重组,在293细胞中包装重组腺病毒颗粒,获得真核细胞表达的栽体pAd-hLTF.以pcDNA3X为模板,PCR扩增hLTF基因,腺病毒穿梭栽体pshuttle-cmv与hLTF重组为pshuttle-cmv-hLTF:再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组为pAd-hLTF质粒:脂质体法将重组pAd-hLTF质粒转染HEK 293细胞.包装成重组腺病毒颗粒.Western blot和ELISA法测定细胞中hLTF基因的表达.结果表明,pAd-hLTT质粒转染293细胞后,7～10 d后,获得细胞裂解液,将细胞裂解产物再次接种新鲜的293细胞,3～5 d后,80%以上的细胞变圆、膨胀、漂浮.Westem blot和ELISA结果显示,上清液中有hLTF基因的表达,为重组人乳铁蛋白的体外表达及其功能分析奠定了基础.     

重组人神经生长因子β腺病毒的构建及鉴定

[目的]克隆带有His标签的人神经生长因子β基因(human nerve growth factor beta,hNGF"β),并构建hNGF"β与EGFP基因复制缺陷型腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤的应用研究奠定基础。[方法]用Trizol试剂提取人胎肝总RNA,应用RT-PCR方法以自行设计的带有His标签的引物来扩增NGF"β基因;将所扩增的NGF"β基因经酶切、纯化,与IRES-EGFP片段共同插入到Pshuttle-cmv载体中,测序后,利用基因同源重组技术构建hNGF基因的复制缺陷型腺病毒载体AdNGF"β,经鉴定,转染HEK293细胞,观察EGFP表达并检测重组腺病毒的病毒滴度。[结果]克隆的hNGF基因序列与GenBank中的hNGF基因序列完全一致并在3′端携带上His标签;重组腺病毒载体AdNGF-β经PacⅠ酶切得到大于23.0和4.5或2.9kb大小的2个片段,表明同源重组成功。2种重组腺病毒经脂质体介导转染293细胞后,均可观察到绿色荧光蛋白。收获病毒并测定感染滴度分别为1.00×109和0.99×109pfu/ml。[结论]克隆了带有His标签的hNGF"β基因,并成功构建了重组腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤研究奠定基础。     

林麝胚胎移植研究初报

用獐子作受体进行林麝的胚胎移植试验。应用PMSG和PGF24诱导供体林麝和受体獐进行同期发情试验，供体林麝在发情配种后8～10天，手术法进行胚胎收集，结果表明，单独应用PMSG或PGF24使供体林麝与受体獐达到了预期同期发情效果，对2头林麝进行手术，发现卵巢上各有数枚黄体存在，在冲卵液中未检到胚胎。研究揭示，手术法可能是适合林麝的胚胎收集方法之一。     

人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性.结果表明:人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的抑制呈现时间和剂量依赖性,有73%的Hela细胞停滞在G0～G1期;Western-blot检测结果显示人乳铁蛋白可以上调p53蛋白的表达; 人乳铁蛋白作用48 h后Caspase-3的活性是0小时时的5.5倍,二者差异极显著(P<0.01).结果说明人乳铁蛋白能显著抑制宫颈癌Hela细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡、调控细胞周期、上调p53表达、活化Caspase-3有关.