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采用PCR方法从绿脓杆菌ATCC27853菌株基因组扩增其外毒素A(PEA)全长编码基因,并将PEA基因插入到pcDNA3.1A真核表达载体中,构建成pcDNA3.1/ PEA质粒表达载体。经磷酸钙介导将重组质粒转染 HEK293T 细胞进行表达。结果表明本文克隆的PEA基因与标准菌株PA103碱基序列基本相似,同源性达99%。表达产物经蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测,表明本文构建的含有原基因信号肽的PEA基因能够在真核细胞进行分泌性表达,这为基于PEA的免疫毒素、疫苗佐剂和疫苗载体的研究奠定了基础。 相似文献
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猪β防御素-2基因在HEK293T细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
用Trizol试剂提取猪血白细胞总RNA,根据已发表的序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增出猪β防御素-2(pBD-2)基因,并将该基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成猪β防御素-2基因的真核表达载体pcDNA3.1A/pBD-2,经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:本试验扩增的pBD-2基因与已发表的序列完全一致。表达产物经Western-blot检测,证明pBD-2能够在真核细胞HEK293T中表达。 相似文献
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种子萌发在一定温度下进行,一般随温度提高种子萌发速率也相应提高,但当温度高于一定值时其萌发速率会相应下降。Bemier等研究表明:烟草种子发芽的最适温度是25~28%,最低温度是7.5~10.0℃,最高温度是40℃。本试验对不同温度下烟草裸种萌发情况进行了研究,为育苗指导提供相应的数据支持。1材料与方法 相似文献
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重组猪β防御素2在毕赤酵母中的表达及其鉴定 总被引:2,自引:1,他引:1
根据GenBank猪β防御素2(pBD-2)的氨基酸序列,参照酵母偏爱的密码子,设计无信号肽序列的pBD-2的基因编码序列,并由公司合成.将合成的基因通过SnaB Ⅰ和Not Ⅰ位点插入到酵母表达载体pPIC9K的α因子信号肽序列下游,构建成pBD-2基因的分泌表达载体pPIC9K/pBD-2.利用电穿孔法将经Sal Ⅰ线性化的pPIC9K/pBD-2质粒导入毕赤酵母GS115中,通过G418加压筛选得到His+Mut+表型的高拷贝转化子.经PCR检测证明pBD-2基因在毕赤酵母染色体上得到整合.阳性重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,用SDS-PAGE方法在发酵上清中检测到重组pBD-2的存在,说明构建重组酵母菌能够分泌性表达pBD-2.琼脂孔穴扩散法检测结果显示,pBD-2对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性. 相似文献
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常见规格的滤嘴烟支质量约为0.92g/支,烟丝质量约为0.7g/支,国家标准规定滤嘴卷烟端部落丝量≤8.0mg/支,即每支烟允许掉落的烟丝质量不允许超过国家标准的1.1%,烟丝在烟支中填充的长度为64mm,在点烟端的长度方向上如果有超过0.7mm的掉落量,就会出现指标超标。目前涉及可能影响卷烟端部落丝的原因主要有卷烟卷制的现场控制、烟丝结构、烟丝的耐加工 相似文献
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